Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒20T使用說明書使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱：Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒20T使用說明書
儲(chǔ)存條件：裂解緩沖液和檢測(cè)液室溫保存；其他-20℃避光保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Caspase3活性檢測(cè)試劑盒(Caspase3ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中Caspase3酶活性或純化的Caspase3酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也稱CPP32、Yama或apopain，有時(shí)被寫作caspase-3或caspase3，屬于caspase家族的CED-3亞家族(CED-3subfamily)，是細(xì)胞凋亡過程中的一個(gè)關(guān)鍵酶。Caspase3是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究多的一個(gè)caspase。Caspase-3在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段，Caspase-3被激活，活化的Caspase-3由兩個(gè)大亞基和兩個(gè)小亞基組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase3可以剪切procaspase3、6、7和9，并可以直接特異性剪切許多caspase底物，包括PARP，ICAD，gelsolin和fodrin等。這些由caspase3介導(dǎo)的蛋白剪切是細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的重要組成部分。

Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒20T使用說明書操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒20T使用說明書實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
Cordia ecalyculata Resorcinol 間本二酚 108-46-3 C6H6O2 ≥95%

羥基紅花皇色速Axy7noxyscffloryqllowc20mg/支

(R型)人參皂苷Rh2 20(R)Ginsenoside Rh2 20mg HPLC≥98% 暫無(wú)簡(jiǎn)介

HPLC法含量測(cè)定*100626- 200702 常溫，避光100mg

Flecainide Acetate 醋酸扶卡尼標(biāo)準(zhǔn)品54143-56-5 200mg
142-47-2 谷安酸一鈉標(biāo)準(zhǔn)品 1g

紫蓳靈;紫堇醇靈減PurpleJinLing;Corydalisalcoholspiritalkali18797-79-0HPLC≥98%,20mg/支

5,7-Dixy7noxychroMone 5,7-二輕基色原同 31721-94-5

炔本酰草胺 標(biāo)準(zhǔn)品 號(hào)：23950-58-5 250mg

4-甲基傘形酮(羥甲) 90-33-5 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢
99300-78-4 鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品 100mg

遠(yuǎn)志醋Polygalacicacid338-71-HPLC≥98%,20mg/支

Antirhine 16049-28-8

Dextrometxorphan*標(biāo)準(zhǔn)品125-71-32g

肌醇 87-89-8 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢
溴化铔，英文名或英文縮寫：Ammonium bromide，級(jí)別：AR，99.8%，規(guī)格：500克

己酸乙脂NA

1,3-二[三(羥甲基)甲基]丙烷，英文名或英文縮寫：BIS-TRIS propane，級(jí)別：AR，規(guī)格：5克

赤芝酸B Lucidenic acid B (HPLC,≥98%) 95311-95-8 10MG 通用試劑

陶氏樹脂1x8，200-400目 DOWqX(R) 1X8 6067-37-0
3-本酸shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光25克

13770-61-1銦(陰涼)INDIUM nitnATE

苦酮酸shēng huà shì jì容量：2～8℃1克

2-甲氧基 2-Methoxy,99% 1993-4-9 25G 通用試劑

葡聚糖 T-2000 (右... Dextran T-2000 (分子量:2000,000) 9004-54-0 10G 分離試劑
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒20T使用說明書Triaconta-三十烷醇1克USP級(jí)，660U/mg

血液*NA

酚紅葡萄糖肉湯shēng huà shì jì容量：100克

乙酸 Hydr acetate,97% 7335-65-1 5G 通用試劑

三白草酮 Sauchinone (≥98%,HPLC) 177931-17-8 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品