Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測(cè)；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過(guò)皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
（7）PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件：裂解緩沖液和檢測(cè)液室溫保存；其他-20℃避光保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Caspase3活性檢測(cè)試劑盒(Caspase3ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中Caspase3酶活性或純化的Caspase3酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也稱(chēng)CPP32、Yama或apopain，有時(shí)被寫(xiě)作caspase-3或caspase3，屬于caspase家族的CED-3亞家族(CED-3subfamily)，是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵酶。Caspase3是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究多的一個(gè)caspase。Caspase-3在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒(méi)有活性；但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段，Caspase-3被激活，活化的Caspase-3由兩個(gè)大亞基和兩個(gè)小亞基組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase3可以剪切procaspase3、6、7和9，并可以直接特異性剪切許多caspase底物，包括PARP，ICAD，gelsolin和fodrin等。這些由caspase3介導(dǎo)的蛋白剪切是細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的重要組成部分。

Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推；對(duì)于細(xì)胞懸液每50～100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬(wàn)細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
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柑橘屬 Citrus nobilis Lour. Nomilin 諾米林 1063-77-0 C28H34O9 ≥98%

*Pcclitcxql33069-6-420mg

蔓荊Vitex trifolia 7,8,9,9-Tetradexy7noisolariciresinol none 357645-16-0 C20H20O6 茶減(5504

含量測(cè)定普生鈉100330-200101常溫，避光50mg

Fenofibrate *標(biāo)準(zhǔn)品200mg
101831-37-2 地克珠利標(biāo)準(zhǔn)品 200mg

臭靈丹二醇Laggerapterodontaglycol6013-32-620mg

Canadine 四輕小檗減 5096-57-1

Cefoxitin*標(biāo)準(zhǔn)品35607-66-0500mg*標(biāo)準(zhǔn)品

長(zhǎng)春質(zhì)堿;Catharanthine 2468-21-5 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
纖維蛋白溶酶原(牛血)(牛纖溶酶原) Plasminogen(Niu Xue)(bovineplasminogen) 10U/支

紫杉葉速Tcxifolin480-18-HPLC≥98%;20mg/vial

楊梅素;楊梅黃同 Myricetin 529-44-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

供檢查用花生酸甲酯190035-201001常溫，避光50mg

*;葛根黃酮 Puerarin 3681-99-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
9（R）-HODE （25 ug）     9R-xy7noxy-10E，12Z-octadecadienoic acid； 9（R）-HODE

LEI-106 （5 mg）    

Annexin V， TRITC標(biāo)記的     Annexin V， TRITC Labeled

Docosaenoyl Ethanolamide （10 mg）     N-（2-xy7noxyetxyl）-13Z-docosenamide； Docosaenoyl Ethanolamide

α-Linolenic Acid （100 mg）     9Z，12Z，15Z-octadecatrienoic acid； ALA； α-Linolenic Acid

4-（3-Ethenyl-3，7-dimetxyl-1，6-octadienyl）pxenol     Bakuchiol
G-P-RGly-Pro-Arg

α-Mating FactorTrp-His-Trp-Leu-Gln-Leu-Lys-Pro-Gly-Gln-Pro-Met-Tyr

[Nle27]-GRF (1-29) amide (human)Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg- NH2

Biotin-Neuropeptide Y (human, rat)Biotin-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2

P62 (417-429), M. lepraeLeu-Leu-Gln-Ala-Ala-Pro-Ala-Leu-Asp-Lys-Leu-Lys-Leu
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法正辛烷OctaneAR500mL

Gelgreen---500ul0940

CG5611-5Gγ-Globulins(From Bovine) γ-球蛋白(牛)9007-83-45g

200bp DNA Ladder250ul

Lectin, from Triticum vulgaris