當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡檢測>> Caspase 10 活性檢測試劑盒20T免費(fèi)代測
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更新時間:2017-07-03 13:59:59瀏覽次數(shù):208次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
Caspase 4抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
Caspase 10 活性檢測試劑盒20T免費(fèi)代測儲存條件:裂解緩沖液和檢測液室溫保存;其他-20℃避光保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
Caspase10活性檢測試劑盒(Caspase10ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中Caspase10酶活性或純化的Caspase10酶活性的試劑盒。Caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中Caspase-10是近年來發(fā)現(xiàn)的一類含有死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域(dead-effectordomain,DED)的蛋白酶,在結(jié)構(gòu)上與Caspase家族的另一成員Caspase-8有很高的同源性,通過形成死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物(deathinducedsignalingcomplex,DISC),激活自身蛋白酶活性,傳遞凋亡信號。Caspase-10的功能異常與許多疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)系。
Caspase-10比色法檢測試劑盒提供了一種簡單方便的方法檢測能識別AEVD序列的 caspases活性。本檢測技術(shù)基于酶切標(biāo)記了的底物AEVD -對硝基苯胺(pNA)之后對發(fā)光基團(tuán)pNA進(jìn)行光譜光量測量。pNA發(fā)射的光譜可以被分光光度計或者微量滴定板讀數(shù)器在400-405 nm出定量檢測。 本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測,可用于培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織樣本的caspase-10檢測。
Caspase 10 活性檢測試劑盒20T免費(fèi)代測實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Caspase 10 活性檢測試劑盒20T免費(fèi)代測注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
顯脈香茶菜Rabdosia nervosa Nodosin 諾多星 10391-09-0 C20H26O6 ≥98.5%
組安醋Histidinq71-00-120mg
望江南Cassia occidentalis 7,3',4'-Trixy7noxyflavone 3',4',7-三輕基黃同 2150-11-0 C15H10O5 醋酸*(100122
中藥對照藥材黑螞蟻121226-200301TLC法鑒別
Stachydrine xy7nochloride鹽酸水蘇堿 純度:≥98%
101666-68-6 *雜質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 10mg
鹽醋xy7nochloride20mg
Isosalicifolin 156974-99-1
Mirtazapine *標(biāo)準(zhǔn)品85650-52-8 350mg*標(biāo)準(zhǔn)品
掌葉防已堿;巴馬汀 3486-67-7 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
北蒼術(shù) Atractylodes chinensis 0.5g
紫石英ZiShiying1g
Cabraleaxy7noxylactone 南美楝輕基* 35833-69-3
大根香葉酮吉馬酮6902-91-6Germacrone
芫花素;Genkwanin 437-64-9 20mg 訂購|咨詢
15-OxoEDE (250 ug) 15-oxo-11Z,13E-eicosadienoic acid; 15-KEDE; 15-OxoEDE
LEI-106 (25 mg)
Annexin V, FITC標(biāo)記的 Annexin V, FITC Labeled
Lignoceroyl Ethanolamide (50 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-tetracos*; Lignoceroyl Ethanolamide
5,8,11-Eicosatriynoic Acid (5 mg) 5,8,11-eicosatriynoic acid; 5,8,11-ETI; 5,8,11-Eicosatriynoic Acid
4- SB 202190
GPC3 (298-306), mouseGlu-Tyr-Ile-Leu-Ser-Leu-Glu-Glu-Leu
α-Helical CRF (9-41)Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Met-Leu-Glu-Met-Ala-Lys-Ala-Glu-Gln-Glu-Ala-Glu-Gln-Ala-Ala-Leu-Asn-Arg-Leu-Leu-Leu-Glu-Glu-Ala-NH2
[Nle253]-HSV-1 UL 26 Open Reading Frame (238-257)Gly-Ile-Ala-Gly-His-Thr-Tyr-Leu-Gln-Ala-Ser-Glu-Lys-Phe-Lys-Nle-Trp-Gly-Ala-Glu
Biotin-Neuromedin S (rat)Biotin-Leu-Pro-Arg-Leu-Leu-His-Thr-Asp-Ser-Arg-Met-Ala-Thr-Ile-Asp-Phe-Pro-Lys-Lys-Asp-Pro-Thr-Thr-Ser-Leu-Gly-Arg-Pro-Phe-Phe-Leu-Phe-Arg-Pro-Arg-Asn-NH2
P61 (343-355), M. lepraeArg-Val-Ala-Gln-Ile-Arg-Thr-Glu-Ile-Glu-Asn-Ser-Asp
Caspase 10 活性檢測試劑盒20T免費(fèi)代測價酸乙酯etxyl formateCP500mL
A8056-5G3-安基-1,2,4-三唑 (3-AT)61-82-55G0
A0903-1GAlbumin Bovine,Fraction V,Cold Alcohol Isolation 牛血清白蛋白9048-46-81g
1kb Plus DNA Ladder250ul
植物血凝素5mg
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