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Annexin V-FITC/PI 雙染細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書

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更新時間:2017-07-03 13:58:16瀏覽次數(shù):543次

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Annexin V-FITC/PI 雙染細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
Annexin V-FITC/PI 雙染細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書儲存條件:2-8℃避光保存。*保存于-20℃避光。

有效期:一年。

產(chǎn)品簡介:

細胞凋亡是細胞的基本特征之一,它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。在正常細胞中,磷脂酰*(PS)只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰*(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi),巨噬細胞可以識別翻轉(zhuǎn)到細胞膜表面的PS從而將這些程序性死亡的細胞清除,因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應,而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kDCa2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。PS外翻發(fā)生在細胞核破裂,DNA化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前,這使得AnnexinVPS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。

Annexin V-FITC/PI 雙染細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
1)取 1060 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
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兩面針 Zanthoxylum nitidum (Roxb.)DC. Nitidine Chloride 錄化兩面針堿 13063-04-2 C21H18NO4+ 98%

芝麻酚Sqscmol233-31-320mg

葉底珠Securinega suffruticosa 5-Tricosyl-1,3-benzenediol 5-二十三基-1,3-本二醇 70110-60-0 C29H52O2 達那坐(100126

HPLC含量測定錄典羥喹100325-200901常溫,避光100mg

*相關(guān)物質(zhì)C標準品217636-48-1 25mg
100643-71-8 錄雷他定相關(guān)物質(zhì)A標準品 15mg

Cimicfuga goetida L. 升素 37921-38-3 C16H18O6 98% 異環(huán)靈酰安 雜質(zhì)A(I0060002

生物芐呋菊酯標準 聯(lián)本標準品 雙嘧草迷標準品

辛基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C標準品乙基己基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C20mg

遼東楤木皂苷VII HPLC98%;20mg 訂購|咨詢
小葉藤黃Garcinia cowa Norathyriol 降阿賽里奧,1,3,6,7-四羥基口山酮 3542-72-1 C13H8O6 99%

紫蘇醛Pqrillccldqhydq18031-40-820mg

狹葉獐牙菜Swertia angustifolia alpha-Tocopherolinoneone 托可醌 2067006 C29H50O3 丙酸倍錄米松(100119

檢查用*100331-201002常溫,避光50mg

Finasteride *標準品98319-26-7 200mg
15S-HEDE 100 ug     15S-xy7noxy-11Z13E-eicosadienoic acid; 15S-HEDE

α-difluorometxyl-DL-Arginine 10 mg     DFMA|RMI 71897; 2-difluorometxylarginine

DEAC-dUTP 溶解于1 mM Tris緩沖液(pH 7。5     DEAC-dUTP 1 mM in Tris Buffer pH 7。5

Tricosanoyl Ethanolamide 5 mg     N-2-xy7noxyetxyl-tricos*; Tricosanoyl Ethanolamide

5Z),8Z),11Z-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide 10 mg     N-2-xy7noxyetxyl-5Z8Z,11Z-eicosatrienamide Mead Acid Ethanolamide; 5Z),8Z),11Z-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide

1-     Dantrolene wo7ium
gp100 (619-627)Arg-Leu-Met-Lys-Gln-Asp-Phe-Ser-Val

α-Conotoxin SIATyr-Cys-Cys-His-Pro-Ala-Cys-Gly-Lys-Asn-Phe-Asp-Cys-NH2 (Disulfide bridge: Cys2 -Cys7,Cys3 - Cys13)

[Nle10]-Neurokinin A (4-10)Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-Nle-NH2

Biotin-MBP(94-102)Biotin -Ala-Pro-Arg-Thr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg

p60 v-src (137-157)Val-Ala-Pro-Ser-Asp-Ser-Ile-Gln-Ala-Glu-Glu-Trp-Tyr-Phe-Gly-Lys-Ile-Thr-Arg-Arg-Glu
Annexin V-FITC/PI 雙染細胞凋亡檢測試劑盒50T使用說明書錄本ChlorobenzeneAR500mL

DF009DuRed(效果同GelRed)核酸染料(10,000× 水溶液)500ul0

A0332-10GAlbumin Bovine,Fraction V 牛血清白蛋白(五組分)9048-46-810g

酵母質(zhì)粒提取試劑盒50T

L-Cysteine, xy7nochloride, Monohydrate100g

 

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