當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡檢測>> Caspase 9抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
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聯(lián)系我時(shí),請告知來自 儀表網(wǎng)procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
Caspase 4抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
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Caspase 9抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法儲存條件:-20℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
Z-LEHD-FMK是一種高效caspase-9的特異的和不可逆的小分子抑制劑??梢砸种朴?/span>Caspase9激活導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。Z-LEHD-FMK是methyl(4S)-5-[[(2S)-1-[[(3S)-5-fluoro-1-methoxy-1,4-dioxopentan-3-yl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-4-methyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanoyl]amino]-5-oxopentanoate,即C32H43FN6O10,分子量為690.72。
Caspase 9抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Caspase 9抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
印度苦楝樹Azadirachta indica Nimbin 印楝素 5945-86-8 C30H36O9 ≥98%
植醋Phyticccid83-86-320mg
飛龍掌血Toddalia asiatica 5,7,8-Trimetxoxycoumarin 5,7,8-*氧基 60796-65-8 C12H12O5 單元素镥溶液成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)080575
含量測定林旦100324-200001常溫,避光50mg
非諾多泮相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品20mg
10054-06-5 乙胺丁醇相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
毛飯樹Flueggea acicularis (2,4-二輕基本基)以 57576-34-8 C8H7NO2 ≥97% 炔諾同:用于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(Y0000522
*相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品138564-59-7 25mg
Verapamil Related Compound D維拉帕米相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品190850-50-1 50mg
千金子二萜醇 34420-19-4 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
盆架樹Winchia calophylla N-Demetxylechitamine N-去甲基雞骨常山堿 60048-88-6 C21H26N2O4 ≤80%
紫蘇烯Basilene239-2-620mg
北美鵝掌楸Liriodendron tulipifera 2,2,5,5-Tetrametxylcyclohexane-1,4-dione 2,2,5,5-四甲基環(huán)己烷-1,4-二同 86838-54-2 C10H16O2 膽酸(100078
中藥對照藥材毛訶子121206-0101TLC法鑒別
Dexy7nocorydalin脫氫紫堇堿純度:≥98%
15(S)-HEDE (25 ug) 15S-xy7noxy-11Z,13E-eicosadienoic acid; 15(S)-HEDE
Hexanoyl Glycine (500 mg) NSC 224460; N-1-oxohexyl-glycine
Fluorescein-dUTP 溶解于1 mM Tris緩沖液(pH 7。5) Fluorescein-dUTP 1 mM in Tris Buffer (pH 7。5)
Myristoyl Ethanolamide (50 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-tetradec*; AM 3165|Comperlan MM|Schercomid MME; Myristoyl Ethanolamide
11(Z),14(Z),17(Z)-Eicosatrienoic Acid (50 mg) 11Z,14Z,17Z-eicosatrienoic acid; 11(Z),14(Z),17(Z)-Eicosatrienoic Acid
emmonieted Ruthenium Oxychloride Ruthenium Red
gp100 (570-579)Ser-Leu-Ala-Asp-Thr-Asn-Ser-Leu-Ala-Val
α-Conotoxin MIGly-Arg-Cys-Cys-His-Pro-Ala-Cys-Gly-Lys-Asn-Tyr-Ser-Cys- NH2
[Met5,Arg6] EnkephalinTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Arg
Biotin-LC-Protein Kinase G Substrate; Biotin-LC-G-SubtideBiotin-LC-Gln-Lys-Arg-Pro-Arg-Arg-Lys-Asp-Thr-Pro
P55-TNFRLeu-Pro-Gln-Ile-Glu-Asn-Val-Lys-Gly-Thr-Glu-Asp
Caspase 9抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法乙酸甲酯metxyl acetate
17104-019膠原酶IV(原裝)9001-12-11G0
A0332-100GAlbumin Bovine,Fraction V 牛血清白蛋白(五組分)9048-46-8100g
酵母DNA提取試劑盒50T
L-Cysteine500g
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