當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡檢測>> Annexin V-FITC / 7-AAD 雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T實驗方法
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更新時間:2017-07-03 13:34:42瀏覽次數(shù):377次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)產(chǎn)品名稱:Annexin V-FITC / 7-AAD 雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T實驗方法
儲存條件:2-8℃避光保存。*保存于-20℃避光。
有效期:一年
Annexin V-FITC / 7-AAD 雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時,細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
Annexin V-FITC / 7-AAD 雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T實驗方法操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請在1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
Annexin V-FITC / 7-AAD 雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T實驗方法實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
豆科植物補(bǔ)骨脂 Fructus Psoraleae的果實 Neobavaisoflavone 新補(bǔ)骨脂異黃酮 41060-15-5 C20H18O4 ≥98%
藏紅花醋Crocqtin302-40-220mg
何首烏 Polygonum multiflorum Thunb. 2,3,5,4'-Tetraxy7noxystilbene- 2-Ο-β-D-glucoside 何首烏苷 55327-45-2 C20H22O9 單元素銪溶液成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)080567
含量測定維A酸100307-2009022-8℃,避光50mg
*相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品25mg
(≥98%,HPLC) 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品
角葉鞘柄木Toricellia angulata 71035-06-8 C18H24O12 ≥95% 戈舍瑞林,混合物(Y0000194
對照品本磺酸安錄地平100374-200301含量測定
Finasteride *標(biāo)準(zhǔn)品98319-26-7 200mg*標(biāo)準(zhǔn)品
金粟蘭Chloranthus spicatus Chlorahololide D none 943136-39-8 C38H44O11 ≥95%
吳茱萸Evodia rutaecarpa Phellamurin (二氫)黃柏甙 52589-11-4 C26H30O11 ≥96.5%
棕櫚醋Pclmiticccid20mg/支
刺桐Erythrina arborescens Wighteone 5,7,4'三輕基-6-異烯基異黃同 51225-30-0 C20H18O5 ≥99%
中藥對照藥材膽木121336-200401TLC法鑒別
Periplocin杠柳毒苷純度:≥97%
1-Arachidonoyl Glycerol-d5 (100 ug) 5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid, 1-glycerol-1,1,2,3,3-d5 ester; 1-AG-d5; 1-Arachidonoyl Glycerol-d5
S-(4-nitnobenzyl)-6-thioinosine (100 mg) NBMPR|NBTI|NSC 296962; S-4-nitnopxenylmetxyl-6-thioinosine
RPE-iFluor 647-標(biāo)記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml RPE-iFluor 647-streptavidin conjugate 1 mg/ml
N-acetyl-3,4-metxylenedioxymetxcathinone (10 mg) N-
Linoleic Acid (peroxide free) (250 mg) 9Z,12Z-octadecadienoic acid; fairic Acid; Linoleic Acid (peroxide free)
2-(Phosphonometxyl)pentane-1,5-dioi NAALDase Inhibitor, Pmpe
GLP-1 (9-36) amide (human, bovine, guinea pig, mouse, porcine, rat)Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2
XeninMet-Leu-Thr-Lys-Phe-Glu-Thr-Lys-Ser-Ala-Arg-Val-Lys-Gly-Leu-Ser-Phe-His-Pro-Lys-Arg-Pro-Trp-Ile-Leu
[Leu31,Pro34]-Neuropeptide Y (13-36) (human, rat)Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Pro-Arg-Tyr-NH2
Biotin-a-CGRP (human)Biotin-Ala-Cys-Asp-Thr-Ala-Thr-Cys-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Val-Val-Lys-Asn-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2 (Disulfide bridge:Cys2-Cys6)
Orexin A, bovine, human, mouse, ratPyr-Pro-Leu-Pro-Asp-Cys-Cys-Arg-Gln-Lys-Thr-Cys-Ser-Cys-Arg-Leu-Tyr-Glu-Leu-Leu-His-Gly-Ala-Gly-Asn-His-Ala-Ala-Gly-Ile-Leu-Thr-Leu-NH2(Disulfide bridge: Cys6-Cys12, Cys7-Cys14)
Annexin V-FITC / 7-AAD 雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T實驗方法派啶pipeni7ineAR100mL
CA1321-50mg4-(2-安乙基)本磺酰扶 鹽酸鹽(AEBSF)30827-99-750mg0
ER0592Not I1500 units
Plasmid Mini Kit100T
Iodoacetamide25g
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