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細(xì)胞凋亡檢測形態(tài)學(xué)檢測方法

時(shí)間:2018-6-4閱讀:409
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根據(jù)細(xì)胞凋亡檢測固有的形態(tài)特征,人們已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法。
1 光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡
(1) 未染色細(xì)胞:凋亡細(xì)胞的體積變小、變形,細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。
貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。
(2) 染色細(xì)胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質(zhì)分割
成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。
2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況。
常用的DNA特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種染料與DNA的結(jié)合是非嵌入式的,主要結(jié)合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時(shí)發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光。
Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料,儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用時(shí)用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。
DAPI為半通透性,用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml。
結(jié)果評判:細(xì)胞凋亡檢測過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期:Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài);Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡。
大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-2H3
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化);PC-12(低分化)
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化);PC-12(高分化)
大鼠骨髓瘤細(xì)胞;Y3-Ag 1.2.3
大鼠骨肉瘤細(xì)胞;UMR-106
大鼠骨髓瘤細(xì)胞;Y3-Ag 1.2.3
大鼠骨肉瘤細(xì)胞;UMR-106
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞;PC-12 [PC12]
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK
大鼠肝細(xì)胞瘤;H-4-II-E
大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1
細(xì)胞凋亡檢測

 

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