細(xì)胞凋亡檢測(cè)在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細(xì)胞基本相同。

1、無(wú)污染環(huán)境

培養(yǎng)環(huán)境無(wú)毒和無(wú)菌是保證細(xì)胞生存的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí)，與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無(wú)污染、代謝物及時(shí)清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。

2、恒定的溫度

維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定適宜的溫度。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)，溫度上升不超過(guò)39℃時(shí)，細(xì)胞凋亡檢測(cè)代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時(shí)，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡。

3、氣體環(huán)境

氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需用的各種成分。開(kāi)放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需成分，它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的PH值。大多數(shù)細(xì)胞的適宜PH為7.2-7.4，偏離這一范圍對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng)。有資料顯示，原代羊水細(xì)胞培養(yǎng)PH6.8時(shí)適。

細(xì)胞培養(yǎng)液PH濃度的調(diào)節(jié)常用的為加NaHCO3的方法，因?yàn)镹aHCO3可供CO2，但二氧化碳易于逸出，故適用于封閉培養(yǎng)，而羥乙基乙硫磺酸(HEPES)因其對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，也起緩沖作用，有防止PH迅速變化的特性而用于開(kāi)放細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，其大優(yōu)點(diǎn)是在開(kāi)放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值。

4、細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)是既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，按其物質(zhì)狀態(tài)分為半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類(lèi);按其來(lái)源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。

(1)合成培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞所需物質(zhì)的種類(lèi)和數(shù)量嚴(yán)格配制而成的。內(nèi)含碳水化合物、氨基酸、脂類(lèi)、無(wú)機(jī)鹽、維生素、微量無(wú)素和細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。單獨(dú)使用細(xì)胞雖有生存但不能很好的生長(zhǎng)增殖。

(2)天然培養(yǎng)基：使用普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以小牛血清普遍。血清由于含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促粘附因子及其多種活性物質(zhì)。與合成培養(yǎng)基合用，能使細(xì)胞凋亡檢測(cè)順利增殖生長(zhǎng)。常見(jiàn)使用為5-20%。