人肝永生化細胞；THLE-3實驗方法操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量*，使*的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

細胞名稱   人肝永生化細胞；THLE-3實驗方法
形態(tài)特性 上皮細胞

生長特性 貼壁生長

特征特性 THLE-2 (ATCC CRL-10149 和 THLE-3 (ATCC CRL-11233)細胞系是正常肝細胞用SV40大T抗原轉(zhuǎn)染得到。 將含有SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導入兼嗜性包裝細胞株PA317中生產(chǎn)病毒。 THLE-2 and THLE-3表達正常肝上皮細胞特征性的表型。 當注射到無胸腺裸鼠中時，它們不成瘤，具有接近二倍體的核型，不表達甲胎蛋白。 THLE-2 and THLE-3將benzo[a]pyrene, N-nitrosodimet

培養(yǎng)條件 Clonetics Corporation, Walkersville, MD 21793的BEGM培養(yǎng)基(目錄號CC3170)。 套裝包含了500毫升基本培養(yǎng)基及分別凍存的添加劑，我們不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5 ng/ml EGF, 70 ng/ml Phosphoethanolamine。

傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況 PN5

凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測 陰性

STR

同工酶

染色體

使用權限 A類

人肝永生化細胞；THLE-3實驗方法細胞培養(yǎng)
1、冷凍管應如何解凍？
取出冷凍管后， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時， 必須注意安全， 預防冷凍管之爆裂。
2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時， 是否應馬上去除DMSO？
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）， 在解凍之后， 應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細胞大都無法立即適應， 造成細胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源， 所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生*的影響。來自不同物種的血清， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
人十二脂腸腺癌;HuTu-80

人骨髓間充質(zhì)干細胞(骨髓)(HMSC-bm)(5×105)

CM-R032大鼠腸靜脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠單核巨噬細胞;J774A.1 小鼠肝動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞 Mouse

FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人細胞裂解液 (陽性對照)
IgG3 Others Mouse 小鼠 IgG3-Fc 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0119HuH-6(人肝母細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2

小鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

MC3T3-E1 Subclone 14小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14 MC3T3-E1 Subclone 14 in mouse parietal bone cell sub clone 14 before a-MEM培養(yǎng)基+10%FBS

OSM Protein Mouse 重組小鼠 Oncostatin M / OSM 蛋白 (His 標簽)

RS1(大鼠皮膚成纖維樣細胞) 5×106cells/瓶×2 THP-1(人單核細胞)
CL-0119HuH-6(人肝母細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2

IgG3 Others Mouse 小鼠 IgG3-Fc 人細胞裂解液 (陽性對照)

小鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

MC3T3-E1 Subclone 14小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14 MC3T3-E1 Subclone 14 in mouse parietal bone cell sub clone 14 before a-MEM培養(yǎng)基+10%FBS

OSM Protein Mouse 重組小鼠 Oncostatin M / OSM 蛋白 (His 標簽)

RS1(大鼠皮膚成纖維樣細胞) 5×106cells/瓶×2 THP-1(人單核細胞)
多粘菌素B（1.2mg）1.2mg/支*5每支添加于100mlSPS中  進口分裝  脂肪酶  Lipase  號：  9001-62-1  質(zhì)量規(guī)格：  20000U/g,BR

Sodiumsulfadi  進口分裝  β-胸苷(dT);2'-脫氧胸苷  Thymidine   號：  50-89-5  質(zhì)量規(guī)格：  >99%,BR

改良Y培養(yǎng)基  進口分裝  X-GlcA ;5-溴-4--3-吲哚基-β-D-葡糖苷酸環(huán)己胺鹽  X-gluc  號：  114162-64-0  質(zhì)量規(guī)
肉蛋白胨BeefPeptone250克BR  進口分裝  派利多,哌利多（標準品）  Droperidol  號：  548-73-2  質(zhì)量規(guī)格：  含量測定

蠶蛹蛋白胨蠶蛹蛋白胨250克BR  進口分裝  6-疏基嘌呤/6-巰基嘌呤(一水合物)  6-Mercaptopurine monohydrate  號：  6112-76-1  質(zhì)量規(guī)格：  >98.5%,BR

血粉蛋白胨血粉蛋白胨250克BR  進口分裝  */對乙?；?/span>  Paracetamol（Acetaminofen polvo）  號：  103-90-2  質(zhì)量規(guī)格：  >98.5%,BR

全胃蛋白胨全胃蛋白胨250克BR  進口分裝  *(標準品)  Paracetamol（Acetaminofen polvo）  號：  103-90-2  質(zhì)量規(guī)格：  HPLC>99%,標準品
人肝永生化細胞；THLE-3實驗方法我妻氏培養(yǎng)基基礎/我妻氏*基礎/WagstsumaAgarBase用于副溶血性弧菌的溶血試驗250克國產(chǎn)/進口  進口分裝  指狀青霉 Penicillium digitatum

胃蛋白胨BR250克國產(chǎn)/進口  進口分裝  繩狀青霉 Penicillium funiculosum

衛(wèi)矛醇半固體瓊脂/DulcitolSemisolidAgar細菌衛(wèi)矛醇發(fā)酵試驗10克國產(chǎn)/進口  進口分裝  光滑青霉 Penicillium glabrum

衛(wèi)矛醇半固體發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進口  進口分裝  意大利青霉 Penicillium italicum

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