海洋微生物菌種實(shí)驗(yàn)中的操作要點(diǎn)
1、加樣
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。 加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液過(guò)程迅速完成。
2、標(biāo)本的采取和保存
可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。
血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說(shuō)來(lái)，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。
3、試劑的準(zhǔn)備
按Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA試劑盒ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
海洋微生物菌種牛β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA Kit    英文名：    Bovine Beta-Endorphin,β-EP ELISA Kit
牛β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA Kit    英文名：    Bovine Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA Kit
牛β-防御素(β-Defensins)ELISA Kit    英文名：    Bovine β-Defensins ELISA Kit
牛α乳清蛋白(α-La)ELISA Kit    英文名：    Bovine α Lactalbumin,α-La ELISA Kit
牛α晶體B鏈(CRYAB)ELISA Kit    英文名：    Bovine Alpha-crystallin B chain,CRYAB ELISA kit
牛α干擾素(IFN-α)ELISA Kit    英文名：    Bovine Interferon α,IFN-α ELISA Kit
牛α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA Kit    英文名：    Bovine α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit
牛P物質(zhì)(SP)ELISA Kit    英文名：    Bovine substance P,SP ELISA kit
牛N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA Kit    英文名：    Bovine N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit
牛N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA Kit    英文名：    Bovine N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP ELISA kit
牛D-乳酸ELISA Kit    英文名：    Bovine D-lactic acid ELISA Kit
牛C肽(C-Peptide)ELISA Kit    英文名：    Bovine C-Peptide ELISA Kit
牛C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA Kit    英文名：    Bovine C-reactive protein,CRP ELISA Kit
牛5羥色銨/血清素/血清銨(5HT/ST)ELISA Kit    英文名：    Bovine 5-hydroxytryptamine/serotonin,5HT/ST ELISA kit
牛Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)ELISA Kit    英文名：    Bovine N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA kit
牛1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶ζ1(PLCZ1)ELISA Kit    英文名：    Bovine 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase zeta-1(PLCZ1)ELISA kit
牛17羥孕酮(17-OHP)ELISA Kit    英文名：    Bovine 17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit
牛1,25二羥基*3(1,25 DHVD3)ELISA Kit    英文名：    Bovine 1,25-Dihydroxyvitamin D3(1,25 DHVD3)ELISA kit
綿羊ELISA Kit    英文名：    
綿羊組銨(HIS)ELISA Kit    英文名：    Sheep histamine,HIS ELISA kit
綿羊腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA Kit    英文名：    Sheep Tumor Necrosis Factor α,TNF-α ELISA Kit
綿羊中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA Kit    英文名：    Sheep neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit
綿羊脂聯(lián)素(ADIPOQ)ELISA Kit    英文名：    Sheep adiponectin,ADIPOQ ELISA kit
綿羊孕酮受體(PGR)ELISA Kit    英文名：    Sheep progesterone receptor,PGR ELISA Kit
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