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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測(cè)試劑盒>>熒光定量PCR>> 50次糞腸球菌PCR試劑盒
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:糞腸球菌PCR試劑盒
產(chǎn)品分類:熒光定量PCR
貨號(hào):CP101151
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
替莫唑胺-d3質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Temozolomide-d3 豬胃泌酸調(diào)節(jié)素(OXM)試劑盒 Pig oxyomodulin,OXM ELISA kit Humanlymphotoxinα,LTAELISA試劑盒人α(LTA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
(S)賴諾普利-d5質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口(S) Lisinopril-d5 Humanamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40ELISAKit 人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 humanParathyroidhormone,PTHELISAKit人甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
(R)-賴諾普利鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口(R)-Lisinopril Salt HumanLeinizingHormone-ReleasingHormone,LHRHELISA試劑盒人黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 大鼠凝血酶抗凝血酶Ⅲ復(fù)合物(TAT-III)ELISA試劑盒 ,英文名: TAT-III ELISA Kit
賴諾普利環(huán)己基類似物質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Lisinopril Cyclohexyl Analog 組織糖原1酸化酶a(GLYCOGENPHOSPHORYLASE)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒10 人抗Sc1-70抗體(Sc1-70-Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanSc1-70Aibody,Sc1-70-AbELISAKit 96T/48T
乙酰哈巴苷質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品8-O-Acetylharpagide ELISAKitAFP-L1人小扁結(jié)合型甲胎蛋白規(guī)格:48T/96T 凝血酶原(PT)ELISA試劑盒 ,英文名: PT ELISA Kit
黃決明素質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Chrysoobtusin 小鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)ELISA試劑盒 ,英文名: Lep IgG ELISA Kit rabbitplateletactivatingfactor,PAFELISA試劑盒兔子血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/mL,基體:水)質(zhì)量規(guī)格:1.00mg/mL,基體:水Saccharin salt solution 大鼠細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratlymphotactin,Lptn/LTNELISAKit 96T/48T HumanATP-bindingcassetteanspoerA1,ABCA1ELISA試劑盒人腺苷三1酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
桃醛(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:0.96γ-Undecanolactone 人白三烯C4(LTC4)試劑盒 Human Leukoiene C4,LT-C4 ELISA Kit Humanconnectivetissue-activatingpeptideⅢ,CTAPⅢELISAKit人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
糞腸球菌PCR試劑盒PIPES Buffer
植物RNA提取專用高鹽溶液
堿性膠電泳液
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