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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T白斑綜合癥病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:白斑綜合癥病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:White Spot Syndrome Virus(WSSV)
貨號(hào):CP914997
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
原理:
白斑綜合癥病毒探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,產(chǎn)品僅用于科研Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
以下是白斑綜合癥病毒探針法熒光定量PCR試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
DL-, 規(guī)格25g 進(jìn)口/原裝
DL-, 規(guī)格500g 進(jìn)口/原裝
L-醇, 規(guī)格100g 進(jìn)口/原裝
L-醇, 規(guī)格25g 進(jìn)口/原裝
DL-醇, 規(guī)格100g 進(jìn)口/原裝
DL-醇, 規(guī)格1g 進(jìn)口/原裝
DL-醇, 規(guī)格25g 進(jìn)口/原裝
DL-醇, 規(guī)格5g 進(jìn)口/原裝
L-脯, 規(guī)格100g 進(jìn)口/原裝
L-脯, 規(guī)格25g 進(jìn)口/原裝
L-脯, 規(guī)格500g 進(jìn)口/原裝
D-脯, 規(guī)格100g 進(jìn)口/原裝
D-脯, 規(guī)格10g 進(jìn)口/原裝
D-脯, 規(guī)格500g 進(jìn)口/原裝
DL-脯, 規(guī)格100g 進(jìn)口/原裝
血液磷二酯酶(PDE)總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
細(xì)胞磷二酯酶1(PDE1)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
組織磷二酯酶1(PDE1)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
血液磷二酯酶1(PDE1)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
細(xì)胞磷二酯酶1(PDE1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
組織磷二酯酶1(PDE1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
血液磷二酯酶1(PDE1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
細(xì)胞磷二酯酶2(PDE2)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
組織磷二酯酶2(PDE2)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
血液磷二酯酶2(PDE2)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
白斑綜合癥病毒探針法熒光定量PCR試劑盒Lactarius│corrugis資源名稱皺蓋乳菇提供形式:斜面培養(yǎng)物大鼠iFABP ELISA試劑盒
Lactarius│volemus資源名稱多汁乳菇提供形式:斜面培養(yǎng)物大鼠TE ELISA試劑盒
Agaricus│sp.資源名稱白蘑菇提供形式:斜面培養(yǎng)物大鼠MMP-5 ELISA試劑盒
Calvatia│gigantea資源名稱大禿馬勃提供形式:斜面培養(yǎng)物大鼠MMP-4 ELISA試劑盒
Agaricus│edulis資源名稱美味蘑菇提供形式:斜面培養(yǎng)物大鼠MMP-9/Gelatinase B ELISA試劑盒
Pleurotus│porrigens資源名稱貝形側(cè)耳提供形式:斜面培養(yǎng)物大鼠TIMP-1 ELISA試劑盒
Pleurotus│eugrammeus資源名稱真線側(cè)耳提供形式:斜面培養(yǎng)物大鼠bFGF ELISA試劑盒
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