當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞操作
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963808 |
小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞【Mouse Aorta:Normal Aortic Endothelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
ERBETA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25 齊墩果酸 HPLC≥98% 20mg
ERBETA蛋白共沉淀分析試劑盒5 齊墩果酸OβD葡萄糖( →)αL鼠李糖(→)αL阿拉伯糖苷 HPLC≥98% 5mg
ERK蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25 齊墩果酮酸 HPLC≥98% 20mg
ERK蛋白共沉淀分析試劑盒5 奇任醇 HPLC≥98% 20mg
F.solaniRFLP基因分析試劑盒20 千層紙素 HPLC≥98% 20mg
FAM蛋白標(biāo)記試劑盒3(200微克/) 千層紙素AβD葡萄糖醛酸苷 HPLC≥94% 5mg
FGP處理DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒20 千金藤素 HPLC≥98% 20mg
FITC標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 千金子二萜醇 HPLC≥98% 20mg
FITC標(biāo)記二抗POD轉(zhuǎn)換試劑盒10 千金子二萜醇二乙酰苯甲酰酯 HPLC≥98% 20mg
FITC蛋白標(biāo)記試劑盒3(200微克/) 千金子甾醇 HPLC≥98% 20mg
Rat myoglobin (MYO/MB) ELISA Kit 大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒 阿托伐醌,阿托喹酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Atovaquone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Humanglycophosphatidylinositol,GPIELISAKit 人糖0脂酰肌醇(GPI)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 阿西替尼 Axitinib 質(zhì)量規(guī)格:>99%,VEGFR 抑制劑,細(xì)胞培養(yǎng)級
differeiation40ligand,sCD40LELISA試劑盒兔子可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 阿扎哌隆 Azaperone 質(zhì)量規(guī)格:>99%
載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物I蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 鹽酸阿扎司瓊 Azasetron HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
MouseEmbryonicStemMESPU30,M30ELISAKit小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氮卓斯汀堿 Azelastine base 質(zhì)量規(guī)格:>97%
小鼠髓分化因子88(MyD88)ELISA試劑盒 ,英文名: MyD88 ELISA Kit 桿菌肽鋅 Bacitracin Zinc 質(zhì)量規(guī)格:≥60U/mg,USP,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
豚鼠球蛋白E(IgE)ELISA檢測試劑盒guineapigImmunoglobulinE,IgEELISAKit 96T/48T 鹽酸貝那普利/苯那普利 Benazepril 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
牛結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒 Bovine Haptoglobin,Hpt/HP ELISA KIT 鹽酸貝那普利/苯那普利(標(biāo)準(zhǔn)品) Benazepril 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
英文名稱HumanBonemorphogeneticprotein7ELISAKit人骨成型蛋白質(zhì)7(BMP-7)規(guī)格:96T/48T 苯扎貝特 Bezafibrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%
動物細(xì)胞/組織亮氨酸氨基肽酶(leucineaminopeptidase;LAP)電泳分析試劑盒5 苯扎貝特(標(biāo)準(zhǔn)品) Bezafibrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞操作冰凍切片組織組蛋白熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 普拉洛芬 HPLC≥98% 20mg
冰凍組織固著液50毫升 普拉洛芬 Pranoprofen 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
病毒HRP標(biāo)記制備試劑盒5(100微克/) 普拉克索堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Pramipexole Base 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
病毒包裝20樣本 普拉克索堿 Pramipexole Base 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%
波形蛋白(Vimein)結(jié)合分子(bindingmolecules)檢測試劑盒20 普拉格雷 Prasugrel 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR
玻璃清潔劑(櫥窗、大門、汽車玻璃等)500毫升/瓶 普伐他汀四丁胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Pravastatin1,1,3,3-tetramethylbutylamine 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
不溶性GST融合蛋白溶解試劑盒10 普伐他汀內(nèi)酯 Pravastatin Lactone 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
部分蛋白酶切多肽譜分析試劑盒10 普伐他汀1,1,3,3-Tetramethylbutylamine Pravastatin 1,1,3,3-Tetramethylbutylamine 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
草莓*培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 普伐他汀 Pravastatin 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
層連蛋白/板層素(LN)ELISA檢測試劑盒MonkeyLaminin,LNELISAKit 96T/48T 普伐他丁鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Pravastatin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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