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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞說(shuō)明
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞【Human Brain: Normal Vein Endothelial cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞說(shuō)明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963767 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
英文名稱RatSubstanceP大鼠P物質(zhì)(SP)規(guī)格:96T/48T 二氫酮洛芬(非對(duì)映) Dihydro Ketoprofen (Mixture of Diastereomers) 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱RatSubstanceP大鼠P物質(zhì)(SP)規(guī)格:96T/48T 二氫酮洛芬β-D-葡萄糖苷酸,非對(duì)映 Dihydro Ketoprofen β-D-Glucuronide, Mixture of Diastereomers 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱RatT3大鼠狀腺原氨酸(T3)規(guī)格:96T/48T 來(lái)氟米特3-異構(gòu)體 Leflunomide 3-Isomer 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱RatT3大鼠狀腺原氨酸(T3)規(guī)格:96T/48T 去鹽酸左氧氟沙星 Desmethyl Levofloxacin 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱RatT4大鼠高敏甲狀腺素(T4)規(guī)格:96T/48T 左氧氟沙星 Levofloxacin 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱RatT4大鼠高敏甲狀腺素(T4)規(guī)格:96T/48T 左氧氟沙星-d8 Levofloxacin-d8 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱RatT4大鼠甲狀腺素(T4)規(guī)格:96T/48T 5-羥基氯諾昔康 5-Hydroxy Lornoxicam 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱RatT4大鼠甲狀腺素(T4)規(guī)格:96T/48T 氯諾昔康-d4 Lornoxicam-d4 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱Rattarate-resistaacidphosphataseorm5b大鼠抗酸性0酸酶5b(ACP5b)規(guī)格:96T/48T N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦雜質(zhì)) N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity) 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱Rattarate-resistaacidphosphataseorm5b大鼠抗酸性0酸酶5b(ACP5b)規(guī)格:96T/48T N-三苯洛沙坦(洛沙坦雜質(zhì)H) N-Trityl Losartan (Losartan Impurity H) 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
RatProstaglandinF2α,PGF2αELISA試劑盒大鼠前列腺素F2α(PGF2α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 異維A酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Isotretinoin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠鐵調(diào)素(Hepcidin)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 美羅培南 Meropenem trihydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,三水合物
Rat melanocyte aibody (MC Ab) ELISA Kit 大鼠黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)ELISA試劑盒 美羅培南(標(biāo)準(zhǔn)品) Meropenem trihydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品,三水合物
HumanglycolipidaoaibodyELISAKit 人抗糖脂抗體(glycolipid)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 硫酸卡那霉素 Kanamycin mono sulfate 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)≥750IU/MG,BP,BR
Chickeoxoplasmacirculatingaigen,TCAELISA試劑盒雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸卡那霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Kanamycin mono sulfate 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
載玻片細(xì)胞RHO蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 酮舍林鹽 Ketanserin Tartrate 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
MousefactorB,BFELISAKit小鼠B因子(BF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 酮舍林鹽(標(biāo)準(zhǔn)品) Ketanserin Tartrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠鐵調(diào)素(Hepc)ELISA試劑盒 ,英文名: Hepc ELISA Kit 酮康唑 Ketoconazole 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
小鼠白介素13(IL-13)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseIerleukin13,IL-13ELISAKit 96T/48T 酮康唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Ketoconazole 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
人瓜氨酸試劑盒 Human Ciulline ELISA Kit 霉素,柱晶白霉素 Kitasamycin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)≥1300U/MG,BR
人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞說(shuō)明RatProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISA試劑盒大鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫荷包牡丹堿 HPLC≥98% 10mg
RatprocollagenⅠN-terminalpeptide,PⅠNPELISAKit大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫鉤藤堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Corynoxeine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatprocollagenⅠN-terminalpeptide,PⅠNPELISA試劑盒大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫鉤藤堿 HPLC≥98% 20mg
RatprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫茯苓酸 HPLC≥98% 10mg
RatprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISA試劑盒大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫二異丁香酚(標(biāo)準(zhǔn)品) Dehydrodiisoeugenol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatProgesterone,PROGELISAKit大鼠孕激素/孕同(PROG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫二異丁香酚 HPLC≥98% 20mg
RatProgesterone,PROGELISA試劑盒大鼠孕激素/孕同(PROG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫丹參新酮 HPLC≥98% 20mg
Ratprogesteronereceptor,PGRELISAKit大鼠孕同受體(PGR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫丹參酮IIA HPLC≥95% 20mg
Ratprogesteronereceptor,PGRELISA試劑盒大鼠孕同受體(PGR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫齒孔酸 HPLC≥98% 10mg
RatProgesteronereceptor,PROGRELISAKit大鼠孕同受體(PROGR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫表雄酮 HPLC≥98% 20mg
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