使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：小麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)waxy-D1基因PCR試劑盒
貨號(hào):CP96913
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是小麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)waxy-D1基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human WNT5A(Protein Wnt-5a) ELISA Kit資源名稱大棕菇種屬:Agaricus│bisporus (J.E. Lange) Imbach分離基物:子實(shí)體

Human PTPRQ(Phosphotidylinositol phosphatase PTPRQ) ELISA Kit資源名稱斑玉蕈種屬:Hypsizygus│marmoreus (Peck) H.E. Bigelow分離基物:子實(shí)體

Human RALB(Ras-related protein Ral-B) ELISA Kit資源名稱香菇?9937種屬:Lentinula│edodes (Berk.) Pegler分離基物:子實(shí)體

Human VIM(Vimentin) ELISA Kit資源名稱多毛孢菌種屬:Pestalotia│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human ABCC4(Multidrug resistance-associated protein 4) ELISA Kit資源名稱疫霉種屬:Phytophthora│sp.分離基物:葉子

Human RAP1B(Ras-related protein Rap-1b) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌莫里遜亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. morrisoni Bonnefoi and de Bar提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human ABCC6(Multidrug resistance-associated protein 6) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌玉米螟亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. ostriniae Ren Gaixin et al.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human ABCC12(Multidrug resistance-associated protein 9) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌巴基斯坦亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. pakistani de Barjac et al.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human RASGRP3(Ras guanyl-releasing protein 3) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌勵(lì)木亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. tochigiensis Ohba et al.分離基物:土壤

Human ABCB4(Multidrug resistance protein 3) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌東北亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. tohokuensis Ohba et al.分離基物:土壤

Human VTN(Vitronectin) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌九州亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. kyushuensis Ohba and Aizawai分離基物:土壤

Human RBM24(RNA Binding Motif Protein 24) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿達(dá)姆斯塔特亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. darmstadiensis Krieg et al.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5) ELISA Kit資源名稱丁香假單胞菌丁香致病變種種屬:Pseudomonas│syringae van Hall pv. syringae van Hall分離基物:小黑楊

Human INSL4(Early placenta insulin-like peptide) ELISA Kit資源名稱黑荊樹根瘤菌種屬:Rhizobium│sp.分離基物:根瘤

Human ASPN(Asporin) ELISA Kit資源名稱中國臺(tái)灣相思根瘤菌種屬:Rhizobium│sp.分離基物:根瘤

Human TPMT(Thiopurine S-methyltransferase) ELISA Kit資源名稱南洋楹根瘤菌種屬:Rhizobium│sp.分離基物:根瘤

Human HMGCR(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase) ELISA Kit資源名稱假木豆根瘤菌種屬:Rhizobium│sp.分離基物:根瘤

Human REDD1(Protein regulated in development and DNA damage response 1) ELISA Kit資源名稱邊莢魚藤根瘤菌種屬:Rhizobium│sp.分離基物:根瘤

Human IFI35(Interferon-induced 35 kDa protein) ELISA Kit資源名稱假地豆根瘤菌種屬:Rhizobium│sp.分離基物:根瘤

Human RGS1(Regulator of G-protein signaling 1) ELISA Kit資源名稱波葉山螞蟥根瘤菌種屬:Rhizobium│sp.分離基物:根瘤
小麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)waxy-D1基因PCR試劑盒IL-1α|IL-1alpha|IL1A|IL1-A|IL1|IL1F1|Preinterleukin 1 Alpha|Hematopoietin-1|Pro-Interleukin-1-Alpha四號(hào)瓊脂用途：四號(hào)瓊脂用于霍亂弧菌的選擇性分離培養(yǎng)。原理：

IL-1β|IL-1beta|IL1B|IL1-BETA|IL1F2|catabolinTCBS瓊脂 (硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉、膽鹽、蔗糖瓊脂)用途：TCBS瓊脂用于腸道致病性弧菌特別是霍亂弧菌和副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB/T4789.7-2008，SN0173-2010，SN1022-2010)。原理：

IL1R1(Interleukin 1 Receptor Type I)||IL-1R1緩沖-甘油溶液用途：緩沖-甘油溶液用于樣品的保存。(GB4789.13-2010)原理：

IL1R2|IL-1R2|CD121b|CDw121b|IL-1R-2|IL-1RT-2|IL-1RT2|IL1R2c|IL1RB3%堿性蛋白胨水用途：3%堿性蛋白胨水用于副溶血性弧菌增菌培養(yǎng)。(GB/T4789.7-2008)原理：

IL1RL1(Interleukin-1 receptor-like 1)|IL-1RL1|Protein ST2|DER4|ST2|T1堿性蛋白胨水用途：堿性蛋白胨水用于嗜堿性細(xì)菌特別是弧菌的選擇性增菌培養(yǎng)。(SN/T1022-2010)原理：

IL-2(Interleukin 2)|IL2|TCGF|Lymphokine葡萄糖肉湯用途：用于細(xì)菌培養(yǎng)，特別是檢測一次性使用衛(wèi)生用品中溶血性鏈球菌(GB15979-2002)及檢測腸桿菌產(chǎn)氣。原理：

IL-20|IL20|ZCYTO10|IL10D匹克氏肉湯基礎(chǔ)用途：匹克氏肉湯基礎(chǔ)用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)(參考GB/T4789.28-2003中4.62，GB/T4789.11-2003)。原理：

IL-22|IL22|IL-D110|IL-TIF|ILTIF|TIFIL-23|TIFa|zcyto18肉浸液肉湯用途：肉浸液肉湯用于金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌和蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))原理：