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實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶（2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：油菜內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)cruciferin基因PCR試劑盒
貨號:CP96919
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。

以下是油菜內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)cruciferin基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human TNFRSF6B(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B) ELISA Kit資源名稱柿苗擬莖點(diǎn)霉種屬:Phomopsis│rojana Gaja分離基物:柿

Human PDE10A(cAMP and cAMP-inhibited cGMP 3',5'-cyclic phosphodiesterase 10A) ELISA Kit資源名稱地錘菌屬種屬:Cudonia│claves提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human MTBP(Mdm2-binding protein) ELISA Kit資源名稱茄腐皮鐮刀菌種屬:Haematonectria│haematococca (Berk. & Broome) Samuels & Rossman提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human PPARGC1A(Peroxisome prolifeRator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha) ELISA Kit資源名稱褐赤刺革菌種屬:Hymenochaete│rubiginosa (Dicks.) Lév.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human SLC26A4(Pendrin) ELISA Kit資源名稱肉座菌屬種屬:Hypocrea│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human TXNIP(Thioredoxin-interacting protein) ELISA Kit資源名稱摩洛哥芽孢桿菌種屬:Bacillus│maroccanus Delaporte and Sasson 1967分離基物:轉(zhuǎn)基因銀中楊根圈土壤

Human TSTA3(GDP-L-fucose synthase) ELISA Kit資源名稱滑子蘑種屬:Pholiota│nameko (T. Ito) S. Ito & S. Imai提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human B3GALT1(Beta-1,3-galactosyltransferase 1) ELISA Kit資源名稱黃白側(cè)耳種屬:Pleurotus│cornucopiae (Paulet) Rolland提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human TTF1(Transcription Termination Factor, RNA polymerase I) ELISA Kit資源名稱銳齒櫟蛙眼種屬:Macrophoma│fusispora Bub.分離基物:水杉

Human B3GALT2(Beta-1,3-galactosyltransferase 2) ELISA Kit資源名稱色二孢種屬:Diplodia│mangiferae Koord.分離基物:芒果

Human DNM2(Dynamin-2) ELISA Kit資源名稱長根小奧德蘑鱗柄變種種屬:Oudemansiella│radicata var. furfuracea (Perk) Pegler et Young提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human C19orf80(Betatrophin) ELISA Kit資源名稱粗柄側(cè)耳(俗名：北風(fēng)菌)種屬:Pleurotus│platypus (Cooke et Massee) Sacc.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human TWIST1(Twist-related protein 1) ELISA Kit資源名稱青霉種屬:Penicillium│sp.分離基物:植物根際

Human TXK(Protein tyrosine kinase 4) ELISA Kit資源名稱*蟬花1-5種屬:Isaria│cicadae Miq.分離基物:子實(shí)體

Human TXNDC5(Thioredoxin domain-containing protein 5) ELISA Kit資源名稱金黃殼囊孢菌種屬:Cytospora│chrysosperma (Pers.) Fr.分離基物:山楊樹皮

Human SFRP1(Secreted frizzled-related protein 1) ELISA Kit資源名稱黃絮鱗鵝膏菌種屬:Amanita│chrysoleuca Pegler分離基物:組織塊

Human BAI3(Brain-specific angiogenesis inhibitor 3) ELISA Kit資源名稱白乳菇種屬:Lactarius│piperatus (L.) Pers.分離基物:組織塊

Human HTT(Huntingtin) ELISA Kit資源名稱黑根須腹菌種屬:Rhizopogon│piceus Berk. & M.A. Curtis分離基物:組織塊

Human IDH1(IsocitRate dehydrogenase [NADP] cytoplasmic) ELISA Kit資源名稱正紅菇種屬:Russula│vinosa Lindblad分離基物:組織塊

Human CRHR1(Corticotropin-releasing factor receptor 1) ELISA Kit資源名稱素馨生棒孢種屬:Corynespora│jasminicola Meenu Kharwar & Bhartiya分離基物:金葉女貞葉片
油菜內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)cruciferin基因PCR試劑盒TFF3(Trefoil factor 3)|ITF|TFI|trefoil factor 3(intestinal)結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)用途：結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂用于水或食品中大腸菌群平板菌落計數(shù)(GB4789.3-2010和SN0169-92)。原理：

TGF-α(Transforming Growth Factor α)|TGFα|TGFA|protransforming growth factor alpha改良月桂基硫酸鹽胰蛋白月示肉湯(MLST)用途：用于奶粉中阪崎腸桿菌的檢驗(yàn)的增菌和分子生物學(xué)檢驗(yàn)方法(PCR)選擇性增菌(GB4789.40-2010和SN1632.2-2005、ISO標(biāo)準(zhǔn))。原理：

TGFBI|βIG-H3(Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3)月桂基硫酸鹽胰蛋白胨-MUG肉湯用途：月桂基硫酸鹽胰蛋白胨用于致病性大腸桿菌(包括O157：H7)的鑒別性試驗(yàn)(GB/T4789.36-2008和SN/T0973-2000)。原理：