使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產品名稱：轉基因品系大豆W98探針法qPCR試劑盒
貨號:CP96984
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉基因品系大豆W98探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Human MYL1(Myosin Light Chain 1, Alkali, Fast Skeletal) ELISA Kit資源名稱類鼻疽桿菌種屬:Malleomyces│pseudomallei提供形式:凍干物

Human NAGase(N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase) ELISA Kit資源名稱類鼻疽假單胞菌種屬:Pseudomonas│pseudomallei提供形式:凍干物

Human NAP(Neutrophil Alkaline Phosphatase) ELISA Kit資源名稱單核細胞增生利斯特氏種屬:Listeria│monocytogenes提供形式:凍干物

Human NEB(Noradrenaline Bitartas) ELISA Kit資源名稱羊布氏菌種屬:Brucella│melitensis提供形式:凍干物

Human NEF3(Neurofilament 3) ELISA Kit資源名稱牛布氏菌種屬:Brucella│abortus提供形式:凍干物

Human NPT(Neopterin) ELISA Kit資源名稱綿羊布氏菌種屬:Brucella│ovis提供形式:凍干物

Human N-ERC(Mesothelin) ELISA Kit資源名稱犬布魯氏菌種屬:Brucella│canis提供形式:凍干物

Human NFE2L2(Nuclear Factor, Erythroid Derived 2 Like 2) ELISA Kit資源名稱問號狀鉤端螺旋體種屬:Leptospira│interrogans提供形式:凍干物

Human NFκB(Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit資源名稱次要分枝桿菌種屬:Mycobacterium│triviale提供形式:凍干物

Human NF-κB p65(Nuclear Factor Kappa B p65) ELISA Kit資源名稱潰瘍分枝桿菌種屬:Mycobacterium│ulcerans提供形式:凍干物

Human NKA(Neurokinin A) ELISA Kit資源名稱鄉(xiāng)村分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium agreste提供形式:凍干物

Human NKB(Neurokinin B) ELISA Kit資源名稱蜂房分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium alvei提供形式:凍干物

Human N-MID-OT(N-MID Osteocalcin) ELISA Kit資源名稱戈登分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium gordonae提供形式:凍干物

Human NPYR1(Neuropeptide Y Receptor Y1) ELISA Kit資源名稱瘰疬分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium scrofulaceum提供形式:凍干物

Human NPYR2(Neuropeptide Y Receptor Y2) ELISA Kit資源名稱產鼻疽分支桿菌塞內加爾亞種種屬:Mycobacterium│Mycobacterium farcinogenes subsp. senegalense提供形式:凍干物

Human NPYR5(Neuropeptide Y Receptor Y5) ELISA Kit資源名稱鳥分枝桿菌森林土壤亞種種屬:Mycobacterium│Mycobacterium avium subsp silvaticum提供形式:凍干物

Human NRG-2(Neuregulin 2) ELISA Kit資源名稱海分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium marinum提供形式:凍干物

Human NRG-3(Neuregulin 3) ELISA Kit資源名稱威斯康星米勒菌種屬:Moelerella│wisconsensis提供形式:凍干物

Human NRG-4(Neuregulin 4) ELISA Kit資源名稱產酸克雷伯菌種屬:Klebsiella│oxytoca提供形式:凍干物

Human NT-ProANP(N-Terminal Pro Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit資源名稱烏克曼枸櫞酸桿菌種屬:Citrobacter│werkmanii提供形式:凍干物
轉基因品系大豆W98探針法qPCR試劑盒Cyclophilin F| Cyp D| CYP3| peptidylprolyl isomerase F| PPIase F| PPIF| Rotamase F形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  CA46細胞系源于Burkitt's淋巴瘤病人的腹水液，是Ｍａｇｒａｔｈ建立的系列淋巴瘤細胞系之一。該細胞系ＥＢＶ核抗原（ＥＢＮＡ）陰性，表達表面ＩｇＭ　和分泌不能與Ａ蛋白結合的ＩｇＭ，１２％的群體細胞表達補體受體，但不表達Ｆｃ受體。細胞生長的群體倍增時間是１６小時，具較快的生長速度。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

CYB5R2|NADH-cytochrome b5 reductase 2|b52形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  ACHN細胞系建系于1979年，衍生于一個患惡性腎癌的22歲男性白人病料。細胞系在MNM培養(yǎng)液中穩(wěn)定傳代150天，然后大量增殖接種裸鼠，4周后產生明顯的局部浸染性腫瘤。干擾素可抑制該細胞系增殖，因此，ACHN細胞可用于人干擾素和干擾素誘導劑的抗細胞增殖研究。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS；1%NEAA

Fructose-bisphosphate aldolase C|Brain-type aldolase|ALDOC|ALDC形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  769-P細胞建系于1975年，衍生于一個患原發(fā)性腎細胞腺癌的58歲女性白人腎組織。該細胞呈球狀，并有模糊的細胞邊沿和*的核質比例。細胞連續(xù)傳29代后群體倍增時間為34.8h，且能在軟瓊脂培養(yǎng)液上增殖。細胞接種免疫抑制的倉鼠頰產生實體腫瘤。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

36 53aa|CALNA3|CAM PRP catalytic subunit|CNA3|PPP3CC形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞來源于一位日本病人的手術切除的腫瘤組織。電鏡下可以看到細胞間典型的橋粒和細胞質中大量的張力絲。1975年發(fā)現(xiàn)有支原體污染，而后被去除。該細胞整合有HPV16基因組，每個細胞中有1~2個拷貝。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

DHH|Desert hedgehog protein|HHG-3|desert hedgehog|desert hedgehog homolog形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  SK-OV-3由Trempe G和Old LJ在1973年從一位64歲白人女性卵巢腺癌患者的腹腔積液分離得到。該細胞對腫瘤壞死因子和幾種細胞毒性藥物（包括白喉毒素、順鉑和阿霉素）耐受。在裸鼠中成瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

CSNK2A1|CK2A1|casein kinase 2|alpha 1 polypeptide|casein kinase II alpha 1 subunit|CK II alpha|CK2 catalytic subunit alpha|casein kinase II subunit alpha|CKII|protein kinase CK2形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  BIU-87建系于1989年（俞莉章等）。該細胞系來源于人膀胱狀移行上皮癌，通常采用5×108細胞0.2ml接種裸鼠皮下，呈進行性腫瘤生長，腫瘤結節(jié)病檢與原標本癌組織相似。22代細胞群體倍增時間為34小時。細胞能在軟瓊脂上生長，克隆形成率23%。BIU-87細胞系對ConA，WGA，PSL均有凝集反應。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

C21orf83|PFM15|PR domain containing 15|PRDM15|Zinc finger protein 298|ZNF298形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  KG1細胞系由H.P.Koeffler和D.W.Golde建立。骨髓抽自一個59歲的患有紅白血病而后又發(fā)展成急性骨髓原性白血病的男性白人。 KG1細胞在形態(tài)上類似急性髓原白血病，表現(xiàn)為明顯的多形化，骨髓母細胞和骨髓細胞占優(yōu)勢。 少量細胞是成熟的粒細胞，也有微量的巨噬細胞和嗜曙紅細胞。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

α-La(Alpha-Lactalbumin)形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  AN3CA細胞建系 于1964年。它衍生于子宮內膜癌患者淋巴結轉移組織，具有癌細胞的基本特性，能在體外長期傳代培養(yǎng)，接種實驗動物產生明顯腫瘤。但細胞的生物學特性及超微結構尚未深入研究，僅發(fā)現(xiàn)該細胞系促黑激素合成為陰性。細胞常用于人子宮內膜癌細胞生物學及其相關特性研究。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS；1%NEAA