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參數(shù)規(guī)格：

產品名稱：轉基因品系大豆W98 PCR試劑盒
貨號:CP96982
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶（2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

以下是轉基因品系大豆W98 PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Human LTA(lipoteichoic acids) ELISA Kit資源名稱隆格沙門氏菌種屬:Salmonella│loenga提供形式:凍干物

Human LpPLA2(Phospholipase A2, Lipoprotein Associated) ELISA Kit資源名稱金加瓦沙門氏菌種屬:Salmonella│kingabwa提供形式:凍干物

Human LTA4H(Leukotriene A4 Hydrolase) ELISA Kit資源名稱弗雷斯諾沙門氏菌種屬:Salmonella│fresno提供形式:凍干物

Human LTβ(Lymphotoxin Beta) ELISA Kit資源名稱沃遜納爾沙門氏菌種屬:Salmonella│wassenaar提供形式:凍干物

Human LTβR(Lymphotoxin Beta Receptor) ELISA Kit資源名稱霍格雷威沙門氏菌種屬:Salmonella│hooggraven提供形式:凍干物

Human LZMg(Lysozyme G) ELISA Kit資源名稱奎寧拉沙門氏菌種屬:Salmonella│quiniela提供形式:凍干物

Human M-AChR(Muscarinic Acetylcholine Receptor) ELISA Kit資源名稱布魯克菲爾德沙門氏菌種屬:Salmonella│brookfield提供形式:凍干物

Human MAG Ab(Anti-Myelin Associated Glycoprotein Antibody) ELISA Kit資源名稱賓寧根沙門氏菌種屬:Salmonella│binningen提供形式:凍干物

Human MAN1A1(Mannosidase Alpha Class 1A Member 1) ELISA Kit資源名稱蒂爾加登沙門氏菌種屬:Salmonella│tiergarten提供形式:凍干物

Human MANF(Mesencephalic Astrocyte Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit資源名稱科季沙門氏菌種屬:Salmonella│coogee提供形式:凍干物

Human MAPK(Mitogen Activated Protein Kinase) ELISA Kit資源名稱布尼克沙門氏菌種屬:Salmonella│bunnik提供形式:凍干物

Human MCSFR(Macrophage Colony Stimulating Factor Receptor) ELISA Kit資源名稱克羅斯尼斯沙門氏菌種屬:Salmonella│crossness提供形式:凍干物

Human MCSP(Melanoma Associated Chondroitin Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit資源名稱浦那沙門氏菌三相變種種屬:Salmonella│poona var.triph提供形式:凍干物

Human MT(Melatonin) ELISA Kit資源名稱香潘沙門氏菌種屬:Salmonella│champaign提供形式:凍干物

Human MFAP4(Microfibrillar Associated Protein 4) ELISA Kit資源名稱嬰兒沙門氏菌種屬:Salmonella│infantis提供形式:凍干物

Human MFI2(Melanotransferrin) ELISA Kit資源名稱威奇塔沙門氏菌種屬:Salmonella│wichita提供形式:凍干物

Human MGL(Monoacylglycerol Lipase) ELISA Kit資源名稱三河島沙門氏菌種屬:Salmonella│mikawasima提供形式:凍干物

Human MGST1(Microsomal Glutathione S Transferase 1) ELISA Kit資源名稱拘櫞酸桿菌種屬:Citrobacter│sp.提供形式:凍干物

Human MHCC/HLA-C(Major Histocompatibility Complex Class I C) ELISA Kit資源名稱阿柏丁沙門氏菌種屬:Salmonella│aberdeen提供形式:凍干物

Human MHCG(Major Histocompatibility Complex Class I G) ELISA Kit資源名稱山夫登堡沙門氏菌種屬:Salmonella│senftenberg提供形式:凍干物
轉基因品系大豆W98 PCR試劑盒PON3(Paraoxonase 3)|paraoxanase-3|Serum paraoxonase|lactonase 3形態(tài)特性上皮細胞樣生長特性貼壁生長特征特性 SPC-A1是一株常用的肺癌細胞系，也被用于肺癌發(fā)病機理和抗腫瘤藥物的體外研究試驗研究。具有典型的上皮細胞狀形態(tài)結構。培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS　

C15|onzin|PLAC8|placenta 8|Protein C15形態(tài)特性淋巴母細胞樣生長特性懸浮生長特征特性 HUT 102是一株T細胞淋巴瘤細胞系。該細胞具有成熟T細胞系的特征，細胞表面呈現(xiàn)IL-2活性，E花環(huán)陽性，表面免疫球蛋白、EBV核抗原和TdT（Terminal deoxyribonucleotidyl-transferase）反應陰性。該細胞系還可釋放與T細胞淋巴瘤相關的單一C型逆轉病毒（retrovirus），即HTLVI病毒。培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS　

RNase 7(Ribonuclease 7)|RNASE7|SAP-2|Skin-derived antimicrobial protein 2形態(tài)特性上皮細胞樣生長特性貼壁生長特征特性 Hela/DDP細胞是湖醫(yī)二院腫瘤所陳惠楨教授等用藥物劑量增選法篩選獲得的Hela細胞耐藥亞株。該細胞除耐順鉑（DDP）外，其它特性均與Hela細胞系相似，可用于常規(guī)的耐藥研究。培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS　

P47|Platelet 47 kDa protein|pleckstrin|PLEK形態(tài)特性淋巴母細胞樣生長特性貼壁生長特征特性 COC1/DDP細胞是陳惠楨教授等用藥物劑量增選法篩選獲得的COC1細胞耐藥亞株。COC1/DDP對順鉑（DDP 1μg/ml）的耐受性是親本株（COC1細胞）的6.5倍，同時，對卡鉑（CBD-CA），絲素C（MMC）也具有不同程度的交叉耐受性?？捎糜诼殉材[瘤治療的體外試驗研究。培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS　

LDLR(Low-density lipoprotein receptor)|FH|FHC|LDL receptor|LDLCQ2|low density lipoprotein receptor|low-density lipoprotein receptor class A domain-containing protein 3形態(tài)特性上皮細胞樣生長特性貼壁生長　特征特性 SW480源自一位51歲白人男性患者的原位直腸腺癌，而SW620源自同一病人一年后的淋巴結轉移灶。該細胞CSAp和直腸抗原3陰性；角蛋白陽性；p53基因第273位密碼子的G →A突變引起Arg→His替代，309位密碼子的C→T突變導致Pro→Ser替代；細胞p53蛋白表達水平升高；癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis 和fos的表達呈陽性；未檢測到癌基因N-myc的表達；不表達Matrilysin（一種與腫瘤侵襲相關的金屬蛋白酶）。有報道稱該細胞表達GM-CSF。ras 培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS　

VLDLR(Very low-density lipoprotein receptor)|CHRMQ1|VLDLRCH|CARMQ1|very low density lipoprotein receptor|VLDL receptor|VLDL-R形態(tài)特性上皮細胞樣生長特性貼壁生長特征特性 ACC-M細胞是ACC-2細胞系經體內外不斷選擇獲得的肺轉移細胞株（ACC-2不形成肺轉移），其裸鼠體內肺轉移率達96%。該細胞株除保留了上皮和腺源性的特性外，體外生長能力大大增強。已證明該細胞株是建立肺高轉移性裸鼠模型的佳材料。培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS　