使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系馬鈴薯SEMT5-15 PCR試劑盒
貨號:CP97048
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉(zhuǎn)基因品系馬鈴薯SEMT5-15 PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Mouse MSP/MST1 ELISA Kit資源名稱沃氏水單胞菌種屬:Aquimonas│voraii分離基物:沉積物/表層沉積物

Mouse NRP1(Neuropilin-1) ELISA Kit資源名稱運(yùn)動替斯崔納菌種屬:Tistrella│mobilis分離基物:水樣/深海底層水樣

Mouse NGF/NGFβ(Nerve growth factor) ELISA Kit資源名稱海底嗜冷桿菌種屬:Psychrobacter│submarinus分離基物:沉積物/表層沉積物

Mouse OPG(Osteoprotegerin) ELISA Kit資源名稱熱殺索絲菌種屬:Brochothrix│thermosphacta分離基物:土壤/南極土壤

Mouse OPN(Osteopontin) ELISA Kit資源名稱哈夫尼菌種屬:Hafnia│paralvei分離基物:土壤/南極土壤

Mouse PCSK9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9) ELISA Kit資源名稱殺真菌鏈霉菌種屬:Streptomyces│globisporus分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse PECAM-1/CD31(Platelet/Endothelial Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit資源名稱嗜冷桿菌種屬:Psychrobacter│sp.分離基物:土壤/南極土壤

Mouse PGRN(Progranulin) ELISA Kit資源名稱黑沙假單胞菌種屬:Pseudomonas│sabulinigri分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse PRL(Prolactin) ELISA Kit資源名稱海動物腸希瓦氏菌種屬:Shewanella│marinintestina分離基物:Squid body

Mouse SELP(P-Selectin) ELISA Kit資源名稱猜也蓬府小單胞菌種屬:Micromonospora│chaiyaphumensis分離基物:土壤/近海紅樹林土壤

Mouse PTX3/Pentraxin 3(Pentraxin-related protein PTX3) ELISA Kit資源名稱廈門鏈霉菌種屬:Streptomyces│xiamenensis分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse RANκ(Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit資源名稱灰黃鏈霉菌種屬:Streptomyces│griseoflavus分離基物:土壤/近海紅樹林土壤

Mouse Rantes(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit資源名稱白酒紅鏈霉菌種屬:Streptomyces│albovinaceus分離基物:土壤/近海紅樹林土壤

Mouse RBP4(Retinol Binding Protein 4, Plasma) ELISA Kit資源名稱雅加達(dá)鏈霉菌種屬:Streptomyces│djakartensis分離基物:土壤/近海紅樹林土壤

Mouse RXFP1(Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit資源名稱鼠尾菌種屬:Muricauda│sp.分離基物:水樣/表層海水

Mouse RETN(Resistin) ELISA Kit資源名稱氧化木糖無色桿菌種屬:Achromobacter│xylosoxidans分離基物:水樣/表層海水

Mouse SAA(Serum amyloid A) ELISA Kit資源名稱食烷菌種屬:Alcanivorax│sp.分離基物:水樣/表層海水

Mouse SCF(Stem Cell Factor) ELISA Kit資源名稱脫氮嗜脂環(huán)物菌種屬:Alicycliphilus│denitrificans分離基物:沉積物/表層沉積物

Mouse SP-D(Pulmonary Surfactant Associated Protein D) ELISA Kit資源名稱潮汐別樣希瓦氏菌種屬:Alishewanella│aestuarii分離基物:沉積物/表層沉積物

Mouse SDF-1(Stromal Cell Derived Factor 1) ELISA Kit資源名稱羅氏極小單胞菌種屬:Pusillimonas│noertemannii分離基物:沉積物/表層沉積物
轉(zhuǎn)基因品系馬鈴薯SEMT5-15 PCR試劑盒anthrax toxin receptor 1|ANTXR1|ATR|TEM8|Tumor endothelial marker 8形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞系是由C. Reznikoff等（1972）從C3H系小鼠胚胎細(xì)胞分離。此細(xì)胞對過度長滿的細(xì)胞有絲分裂抑制非常敏感，在同源小鼠中不產(chǎn)生腫瘤，無自然轉(zhuǎn)化的背景，也不含明顯內(nèi)源性轉(zhuǎn)化鼠類白血病或肉瘤病毒。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

DIO1|Type I iodothyronine deiodinase|Type-I 5'-deiodinase|Type 1 DI|5DI|DIOI形態(tài)特性 生長特性 貼壁生長特征特性  MS1是1994年建株的胰島內(nèi)皮細(xì)胞株。原代培養(yǎng)的胰島內(nèi)皮細(xì)胞用抗G418的溫度敏感型SV40大T抗原(tsA-58-3)轉(zhuǎn)染?？剐钥寺∮每寺…h(huán)分離，并篩選吸收dil-Ac-LDL的。這株細(xì)胞保留了內(nèi)皮細(xì)胞的許多特性，如吸收乙 ?；疞DL和表達(dá)八因子相關(guān)抗原及BEGF受體。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%

DIO3|Type III iodothyronine deiodinase|Type-III 5'-deiodinase|Type 3 DI|5DIII|DIOIII形態(tài)特性  心肌成纖維細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  這株細(xì)胞的細(xì)胞骨架染色突出呈現(xiàn)肌動蛋白，在細(xì)胞質(zhì)中有豐富的平行微絲。 有報(bào)道稱在1uM血管緊張素II存在下，它們會收縮。 細(xì)胞在軟瓊脂中形成克隆，SV40大T抗原陽性。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%；14mM HEPES

NPFFR2|Neuropeptide FF receptor 2|Neuropeptide G-protein coupled receptor|G-protein coupled receptor 74|G-protein coupled receptor HLWAR77形態(tài)特性 生長特性 貼壁生長特征特性  在用鳥氨酸和苯丙氨酸代替精氨酸和酪氨酸的平板上選擇建立了這株細(xì)胞。檢測表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

ADORA1|Adenosine receptor A1形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  這株細(xì)胞生成一種可以感染小鼠細(xì)胞的載體。 Psi2 DAP細(xì)胞生成的載體編碼了人類胎盤堿性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因。 這株細(xì)胞通過Psi2細(xì)胞插入一個(gè)重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒(DAP)基因組衍生而來。 被這種Psi2 DAP產(chǎn)生的載體感染的細(xì)胞表達(dá)的磷酸酯酶可用組織化學(xué)方法檢測，可以用作體內(nèi)追蹤他們命運(yùn)的標(biāo)記。 這些細(xì)胞也可能產(chǎn)生輔助病毒。 檢測輔助病毒的方法或其他逆轉(zhuǎn)錄病毒技術(shù)，請參考Cepko, C.L. Lineage analysis and immortalization of neura 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

ATRN形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  L-M(TK-) cells (ATCC CCL-1.3) 用Wnt-3A表達(dá)載體轉(zhuǎn)染并在含G418的培養(yǎng)基中篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株。 Wnt-3A基因編碼一個(gè)有變異的信號功效分泌性糖蛋白。 Wnt基因控制胚胎發(fā)過程中的許多模式形成和生長事件。 這些細(xì)胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。 它們是目前生產(chǎn)Wnt-3A條件培養(yǎng)基的好來源。 由于這種條件培養(yǎng)基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對于涉及Wnt-3A條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)有必要用其來源細(xì)胞株(ATCC CRL-2648)作對照。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.4 mg/ml G-418

ADORA2A|Adenosine receptor A2a形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  1948年三月建立了NCTC clone 929(小鼠結(jié)締組織)，細(xì)胞系L的克隆。細(xì)胞系L是Z早建立的連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞系之一，而clone 929是Z早的克隆株。 從一只100日齡的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松結(jié)締組織入脂肪組織中建立了親本細(xì)胞系L。 第95代的細(xì)胞系L使用毛細(xì)管法分離單細(xì)胞建立了clone929。 檢測發(fā)現(xiàn)鼠痘病毒陰性。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  馬血清，10%

NODAL|Nodal homolog形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  可產(chǎn)生單克隆抗體，抗人單核細(xì)胞。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS