使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系南瓜CZW-3探針法qPCR試劑盒
貨號:CP97122
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉(zhuǎn)基因品系南瓜CZW-3探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
anti- ATP5G2-Specific antibody資源名稱Sphingobacteriumcomposti種屬:Sphingobacteriumcomposti分離基物:cottonwastecompost安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長條件:28°C

anti- ATP5H antibody資源名稱水螺菌種屬:Aquaspirillumsp.分離基物:filtrateofslowsandfiltersfordrinkingwater,theHague,theNetherlands安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:assayofassimilableorganiccarbonAOC培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長條件:20-25°C

anti- ATP5H antibody資源名稱腸炎沙門氏菌腸炎亞種種屬:Salmonella enterica subsp.enterica分離基物:tissue,animal提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:ControlCulturemediatestingpreparatorytestcontrol培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉汁瓊脂：牛 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。

anti- ATP5I antibody資源名稱萎蔫短小桿菌種屬:Curtobacterium│flaccumfaciens分離基物:類農(nóng)藥農(nóng)田施用土壤提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:在無機鹽培養(yǎng)基:中添50mg/L的農(nóng)藥，對速威降解率達40％，用于教學或科研。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:33

anti- ATP5J antibody資源名稱海藻希瓦氏菌種屬:Shewanella│algae分離基物:海綿Myclae adhaerens 表面提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:potential antifouling 潛在的抗污損活性培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:467生長條件:30℃

anti- ATP5L antibody資源名稱嗜鹽細菌屬種屬:PontibacillusmarinusLimetal.2005分離基物:solarsalternsoil安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:78生長條件:30°C

anti- ATP6AP1 antibody資源名稱丸酮叢毛單胞菌種屬:Comamonas testosterone提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉汁瓊脂：牛 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件:30℃，好氧生長特性革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，嚴格好氧。

anti- ATP6V0D1 antibody資源名稱新鞘氨醇單胞菌種屬:Novosphingobiumtardaugens安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長條件:30℃

anti- ATP6V1A antibody資源名稱蜃樓耶爾森氏菌種屬:Francisellaphilomiragia安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長條件:30℃

anti- ATP6V1A antibody資源名稱脫氮假單胞菌種屬:Pseudomonas sp.提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 10.0 g，牛肉提取物 3.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂 15.0 g，蒸餾水 1.0 L，pH 7.0生長條件:30℃，好氧

anti- ATP6V1B1 antibody資源名稱脫氮付球菌種屬:Paracoccusdenitrificans安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長條件:30℃

anti- ATP6V1B2 antibody資源名稱桃色歐文氏菌種屬:Erwiniapersicina安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長條件:25℃

anti- ATP6V1C1 antibody資源名稱丁香假單胞菌種屬:Pseudomonas syringae提供形式:凍干物安全等級:4模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉汁瓊脂：膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件:26℃，好氧，24-48h，鏡檢為陰性桿菌，純

anti- ATP6V1C2 antibody資源名稱白色噬瓊膠菌種屬:Agarivoransalbus提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:細菌用海洋液體培養(yǎng)基:2216E：酵母膏 1.0g，蛋白胨 5.0g，F(xiàn)e(III) citrate 0.1g，NaCl 19.45g，MgCl2 5.9g，KCl 0.55g，Na2SO4 3.24g，CaCl2 1.80g，Na2CO3 0.16g，KBr 0.08g，SrCl2 34.0mg，H3BO3 22.0mg，NaSiO3 4.0mg，NaF 2.4g，NH4NO3 1.6mg，Na2HPO4 8mg，蒸餾水 1.0L，pH7.6。121℃，15min。生長條件:25℃，好氧

anti- ATP6V1D antibody資源名稱鼠李糖乳桿菌種屬:Lactobacillus rhamnosus提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基:酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸鎂 0.2 g，乙酸鈉 5.0 g，檸檬酸三銨 2.0 g，磷酸氫二鉀 2.0 g，硫酸錳 0.05 g，吐溫80 1.0 g，蒸餾水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min。生長條件:37℃，微好氧存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

anti- ATP6V1E1 antibody資源名稱噬糖鹽紅菌種屬:Halorubrum│saccharovorum提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:Type strain；培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:212生長條件:37℃

anti- ATP6V1E2 antibody資源名稱師崗鏈霉菌種屬:Streptomycesmorookaense(LocciandSchofield)WittandStackebrandt安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:12生長條件:28℃

anti- ATP6V1F antibody資源名稱彎曲芽孢桿菌種屬:Bacillus flexus提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉汁瓊脂：膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件:30℃，好氧
轉(zhuǎn)基因品系南瓜CZW-3探針法qPCR試劑盒小鼠 HSP-27 Chicken DHT(Dihydrotestosterone) ELISA Kit22.5pg/ml39.063-2500pg/ml

小鼠 Hsp-20 Chicken OCLN(Occludin) ELISA Kit46.88pg/ml78.13-5000pg/ml

小鼠 IMA Chicken IL-1A(Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit4.688pg/ml7.813-500pg/ml

小鼠 ALD Chicken PRL(Prolactin) ELISA Kit0.469ng/ml0.781-50ng/ml

小鼠 NA Chicken GH(Growth Hormone) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠chemokine (C-C motif) ligand 1 Camel IFN-γ(Interferon Gamma) ELISA Kit18.75pg/ml31.25-2000pg/ml

小鼠 FK Camel IL-10(Interleukin 10) ELISA Kit9.375pg/ml 15.625-1000pg/ml