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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞培養(yǎng)>>細胞,組織提取物>> T25m2小鼠成骨組織提取物操作

小鼠成骨組織提取物操作

參  考  價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號T25m2

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-06-22 08:58:50瀏覽次數(shù):107次

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小鼠成骨組織提取物操作收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,375%CO2培養(yǎng)。

產(chǎn)品名稱

小鼠成骨組織提取物操作

規(guī)格

T25m2

貨號

CS-964292

小鼠成骨組織提取物【Bone: Normal Mouse Bone Derivatives】骨組織是一種堅硬的結(jié)締組織,是由細胞、纖維和基質(zhì)構(gòu)成的。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠成骨組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準備的第一條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mgRNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF-80度保存。

潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊)
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
2
.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3
.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4
.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
5
.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
3、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min;
3PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
1119-33-1  H-Glu(OEt)-OH  25g  Babesia spp.巴貝斯屬蟲通用LAMP試劑盒 

1119-34-2  H-Arg-OH.HCl  250g  Lactococcus lactis 乳酸乳球菌LAMP試劑盒 

1119-34-2  H-Arg-OH.HCl  5g  Lactobacillus salivarius唾液乳酸桿菌LAMP試劑盒 

1119517-19-9  GLP-1(7-36) Acetate (Human GLP-1-(7-36)-amide Acetate)  10mg  Porcine Torovirus(PToV)豬環(huán)曲病毒RT-LAMP試劑盒 

1119517-19-9  GLP-1(7-36) Acetate (Human GLP-1-(7-36)-amide Acetate)  1mg  Lactococcus spp. 乳酸桿菌屬通用LAMP試劑盒
肺動脈內(nèi)皮細胞RNAHPASMC miRNA5 μg達沙替尼(無水)(標準品)Dasatinib質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品

MTDH Others Human  MTDH / lyric / metadherin 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 阿齊沙坦Azilsartan質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR

豬細胞;ST阿齊沙坦(標準品)Azilsartan質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品

U251細胞,膠質(zhì)瘤細胞 鼠成纖維細胞系,NIH/3T3細胞 肺巨細胞癌低轉(zhuǎn)移細胞株;PG-LH7伊維菌素(標準品)Ivermectin質(zhì)量規(guī)格:分析標準品

KM小鼠未分化神經(jīng)膠質(zhì)瘤瘤株;B22SB431542,SB-431542SB-431542質(zhì)量規(guī)格:>98%TGF-β抑制劑
小鼠成骨組織提取物操作臍帶血單個核細胞 肺成纖維細胞,Hs888Lu細胞 F9(畸胎瘤細胞)林可霉素(U-10149A)質(zhì)量規(guī)格:美國進口Lincomycin (U-10149A)

急性T細胞白血病細胞;Jurkat, Clone E6-1洛美沙星天冬氨酸鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進口Lomefloxacin, Aspartate

IL18R1 Others Mouse 小鼠 IL18R1 / CD218a 細胞裂解液 (陽性對照) 洛伐他汀羥基酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進口Lovastatin Hydroxy Acid,  Salt

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 Cdna-TGF-β1 Dinding Protein cDNA醋酸甲地孕酮-d3質(zhì)量規(guī)格:美國進口Megestrol Acetate-d3

ROBO2 Others Human  ROBO2 細胞裂解液 (陽性對照) 酸棗仁皂苷B(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品Jujuboside B

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