當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>PCR檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T單增李斯特菌(LM)熒光-PCR法檢測試劑盒
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:單增李斯特菌(LM)熒光-PCR法檢測試劑盒
產(chǎn)品分類:熒光-PCR法
貨號:CP99902
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
105330-94-7 6-Methyl-5-azacytidine 10mg 腰果源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
105331-00-8 6-Amino-5-azacytidine 10mM*1mLinWater 哺乳動物源性成分PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
105336-14-9 Azumolene (sodium salt) 10mg 鱈魚源性成分PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
105336-14-9 Azumolene (sodium salt) 1mg 哺乳動物源性成分PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
105336-14-9 Azumolene (sodium salt) 5mg 鱈魚源性成分PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
乙酸-1-萘酯(>98%,BR)質量規(guī)格:>98%,BR1-Naphthyl acetate 英文名稱MouseCCL26ELISAKit小鼠CCL26規(guī)格:96T/48T 大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA試劑盒 ,英文名: Lp-PLA2 ELISA Kit
二十八烷醇(>98%,BR)質量規(guī)格:>98%,BR1-Octacosanol 冰凍切片組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒50 人抗皮膚抗體(ASA)ELISA檢測試劑盒HumanAi-SkinAibody,ASAELISAKit 96T/48T
1-苯基-5-巰基四氮唑(>98.5%,BR)質量規(guī)格:>98.5%,BR1-Phenyl-1H-tetrazole-5-thiol RatEotaxin1ELISA試劑盒大鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 大鼠白細胞抗原DR(HLA-DR)試劑盒 Rat leukocyte aigen-DR,HLA-DR ELISA kit
新戊二醇(>98%,BR)質量規(guī)格:>98%,BR2,2-Dimethyl-1,3-propanediol 小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 CLIAKitfoie-2ELISAKit大鼠含球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2規(guī)格:48T/96T
單增李斯特菌(LM)熒光-PCR法檢測試劑盒SUME-a細胞,人鼻咽癌細胞系 大鼠肝癌細胞,RH-35細胞 CM-H087人冠狀動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mLBoc-L-天冬氨酸 4-芐酯 Boc-L-Asp(OBzl)-OH質量規(guī)格:>98%,BR
P19(小鼠畸胎瘤細胞) 5×106cells/瓶×2Boc-L-天冬氨酸 4-環(huán)己酯 Boc-L-Asp(OcHex)OH質量規(guī)格:>98%,BR
Promocell C-27417 Preadipocyte Growth Medium KIT, 前脂肪細胞生長培養(yǎng)基套裝 500mlBOC-β-丙氨酸Boc-?-Ala-OH質量規(guī)格:>98.5%,BR
腦膜細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)(R)-N-BOC-3-代丙氨酸甲酯Boc-?-iodo-Ala-OMe質量規(guī)格:>95%,BR
RBP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 RBP4 人細胞裂解液 (陽性對照) BOC-D-精氨酸鹽酸鹽Boc-Arg-OH·HCl·H2O質量規(guī)格:BR
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。
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