當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>RNA/DNA提取>> 一管式點突變試劑盒
具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | 一管式點突變試劑盒 |
規(guī)格 | 詳見說明 |
貨號 | CP100805 |
PCR實驗步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
Anti-TNFα單克隆抗體大于1mg9,9-Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl]fluorene11734429,9-雙[4-(2-羥乙氧基)苯基]芴
Anti-IL6R單克隆抗體大于1mg9,9-Bis(4-hydroxyphenyl)fluorene323619,9-雙(4-羥苯基)芴
Anti-IL12單克隆抗體大于1mg9,9-Bis(4-amino-methylphenyl)fluorene7934,9-雙(4-氨基-甲苯基)芴
IL2(human、his標(biāo)簽)0ug9,17-Octadecadiene2,14-diyne,11,16-triol211238-
IL2(human、無標(biāo)簽)0ug9,16-Dioxo0,12,14-octadecatrienoic acid21786
小鼠β甘露糖苷酶elisa試劑盒 小鼠β甘露糖苷酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠β甘露糖苷酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠β甘露糖苷酶試劑盒、小鼠β甘露糖苷酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 Ketoprofen 22071-15-4 中文名:酮基布洛芬 分子式:C16H14O3
小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA試劑盒 Bisoprolol fumarate 中文名:富馬酸比索洛爾 分子式:C22H35NO8 度:98.0%
小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISAKit Bis(4-hydroxy-3,5-dimethylphenyl) sulfone 中文名:雙(4-羥基-3,5-二甲苯基)砜 分子式:C16H18O4S 度:98.0%
小鼠β酚(β-Nph)ELISAKit N-(2-methyl-4-oxopentan-2-yl)-sulfamethoxazole 中文名: 分子式:C16H21N3O4S
小鼠β酚(β-naphthol)LISA試劑盒 Bisphenol P 中文名:雙酚P 分子式:C24H26O2
一管式點突變試劑盒2-甲氧雌二醇(標(biāo)準(zhǔn)品) 2-Methoxyestradiol 質(zhì)量規(guī)格:≥98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品 MouseLactateDehydrogenase,LDHELISA試劑盒小鼠乳酸脫氫酶(LDH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鹽酸苯乙雙胍/降糖靈/鹽酸苯乙福明 Phenformin 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒 ,英文名: PEDF ELISA Kit
鹽酸苯乙雙胍/降糖靈/鹽酸苯乙福明(標(biāo)準(zhǔn)品) Phenformin 質(zhì)量規(guī)格:≥98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測定 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA檢測試劑盒Mousemaixmetalloproteinase1,MMP-1ELISAkit 96T/48T
頭孢哌酮鈉 Cefoperazone 質(zhì)量規(guī)格:870μg-1015μg /mg,USP,BR 人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子(SCF/MGF)試劑盒 Human SCF/MGF ELISA kit
頭孢哌酮鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Cefoperazone 質(zhì)量規(guī)格:效價測定 RatInsulin,INSELISAKit大鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
N-芐基甘氨酸 N-Benzylglycine 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,BR BrdU標(biāo)記法組織石蠟切片細(xì)胞繁殖NBT顯色檢測試劑盒10/20
扎那米韋 Zanamivir 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,一水物 MouseLactoferrin,LTF/LFELISA試劑盒小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
扎那米韋(標(biāo)準(zhǔn)品) Zanamivir 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠狀腺原酸(T3)ELISA試劑盒 ,英文名: T3 ELISA Kit
去氧氟尿苷/5'-脫氧-5-氟尿嘧啶核苷 Doxifluridine/5-Fluoro-5′-deoxyuridine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA檢測試劑盒Mousemonocytechemotacticprotein3,MCP-3ELISAkit 96T/48T
醋甲唑胺 Methazolamide 質(zhì)量規(guī)格:≥97.0%,BR 人干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1(IFITM1/CD225/IFI17)試劑盒 Human IFITM1 ELISA kit
熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
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