參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：一步式探針法qRT-PCR試劑盒
產(chǎn)品分類：RNA/DNA提取試劑盒
貨號(hào)：CP100871
產(chǎn)品規(guī)格：詳見說明
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；
◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。

儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
000X GelRed nucleic acid gel stain in water (效果同GelRed)0 μLMepivacaine968甲哌卡因

DuGreen nucleic acid gel stain 000× in water (效果同GelGreen)0 uL4-Acetamidophenol對(duì)乙酰氨基酚

Sybr Green I nucleic acid gel stain 000× concentrate in DMSO* (Electrophoresis Grade) μLFlorfenicol732314尼考

Sybr Green II RNA gel stain 000× concentrate in DMSO (Electrophoresis Grade) μLFurazolidone675呋喃唑酮

4S Green Plus Nucleic Acid Gel Stain0 μL4-Aminobutyric acid1956/12/24-氨基丁酸
胃動(dòng)蛋白2   英文名稱：   Human Gasokine 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GKN-2  Androstenediol  521-17-5  中文名：雄烯二醇  分子式：C19H30O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

胃蛋白酶抑制劑   5mg  Androstanolone acetate  中文名：雄諾龍醋酸酯  分子式：C21H32O3  度：98.0%

胃蛋白酶測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/24樣              Tetracaine   136-47-0  中文名：鹽酸丁卡因  分子式：C15H25ClN2O2 

胃蛋白酶 1:3000   25g  Androstanolone heptanoate  33776-88-4  中文名：雄諾龍庚酸酯  分子式：C26H42O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

尾加壓素 II(Human Urotensin II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Androstanolone acetate  1164-91-6  中文名：雄諾龍醋酸酯  分子式：C21H32O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
一步式探針法qRT-PCR試劑盒異煙酸  Isonicotinic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR ELISAKitADR兔阿霉素規(guī)格：48T/96T

L-蘋果酸  L-Malic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠牛血清白蛋白(BSA)ELISA試劑盒 ，英文名： BSA ELISA Kit

蛋白酶K溶液(20 mg/ml)  Proteinase K Solution, 20 mg/ml  質(zhì)量規(guī)格：20 mg/ml 人褪黑素(MT)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanMelatonin,MTELISAKit 96T/48T

多聚賴氨酸0.1%溶液  Poly-L-lysine solution ( 0.1%)  質(zhì)量規(guī)格：M.W:150,000~300,000 大鼠載脂蛋白C-I(APOC1)試劑盒 Rat apolipoprotein C-I,APOC1 ELISA kit

鹽酸四環(huán)素溶液,50 mg/ml  Tetracycline  solution, 50 mg/ml, sterile  質(zhì)量規(guī)格：50 mg/ml,滅菌裝 英文名稱HumanE-CadherinELISAKit人E-鈣粘附分子(E-Cadherin)規(guī)格：96T/48T

D-葡糖糖-6-二鈉二水  D-Glucose-6-phosphate, di, dihydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 動(dòng)物組織總ATP酶(totalATPase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

丁二酸鈉(AR)   succinate  質(zhì)量規(guī)格：AR,>99% ELISAKitAβ1-40兔β淀粉樣蛋白1-40規(guī)格：48T/96T

牛血紅蛋白  Hemoglobin  質(zhì)量規(guī)格：BR 小鼠牛血清白蛋白(BSA)ELISA 試劑盒

聚乙二醇10000  PEG 10000  質(zhì)量規(guī)格：分子量9,000~11,000 Rat methylase ELISA Kit (Methylase) 大鼠化酶(Methylase)ELISA試劑盒

DL-蘋果酸  DL-Malic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Humandynamin2,DNM2ELISAKit 人發(fā)動(dòng)蛋白2(DNM2)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照。