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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

 visfatin 小鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素 規(guī)格： 48T/96T

 vaspin 小鼠內(nèi)臟脂肪特異性*蛋白酶抑制劑 規(guī)格： 48T/96T

 EL 小鼠內(nèi)皮脂肪酶 規(guī)格： 48T/96T

 ES 小鼠內(nèi)皮抑素 規(guī)格： 48T/96T

 eNOS-3 小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3 規(guī)格： 48T/96T

 eNOS 小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 規(guī)格： 48T/96T

 ET-1 小鼠內(nèi)皮素1 規(guī)格： 48T/96T

 ET-1 小鼠內(nèi)皮素1 規(guī)格： 48T/96T

 EG-VEGF 小鼠內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T

 ET 小鼠內(nèi)毒素 規(guī)格： 48T/96T

 TCC C5b-9 小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9 規(guī)格： 48T/96T

 ANX-Ⅴ 小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ 規(guī)格： 48T/96T

 IgM 小鼠免疫球蛋白M 規(guī)格： 48T/96T

 IgG 小鼠免疫球蛋白G 規(guī)格： 48T/96T

 IgE 小鼠免疫球蛋白E 規(guī)格： 48T/96T

 IgA 小鼠免疫球蛋白A 規(guī)格： 48T/96T

 OVA sIgE 小鼠卵清蛋白特異性IgE 規(guī)格： 48T/96T

小鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA Kit，48T/96T 小鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA Kit，48T/96T 規(guī)格： 48T/96T

 TrxR 小鼠硫氧還蛋白還原酶 規(guī)格： 48T/96T

 Trx 小鼠硫氧化還原蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 PI Ab-IgG/IgM 小鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM 規(guī)格：

5-溴-2-硝基吡啶 39856-50-3

2-溴-3-氨基吡啶 39856-58-1

2-氯-6-三氟甲基吡啶 39890-95-4

2-氨基-5-溴-3-羥基吡啶 39903-01-0

2-氨基-4-氯嘧啶 3993-78-0

3-溴芐胺鹽酸鹽 39959-54-1

N-羥基-7-氮雜苯并三氮唑 39968-33-7

2,5-二氟溴苯 399-94-0

丙二酸單叔丁酯 40052-13-9

2-氨基-1,3,4-噻二唑 4005-51-0

4,4-哌啶二醇鹽酸鹽 40064-34-4

(甲氧基甲基)三苯基氯化 4009-98-7

1-芐基-3-哌啶酮 40114-49-6

DH5α 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*5溴氟乙酸乙酯 401-55-8

2-溴-5-氟三氟甲苯 40161-55-5

間溴三氟甲苯 401-78-5

3,5-雙三氟甲基環(huán)己醇 401-95-6

3,5-二硝基三氟甲苯 401-99-0

反式-4-羥基-L-*甲酯鹽酸鹽 40216-83-9

2-溴-3-硝基甲苯 41085-43-2

注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。