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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

ì jì 四丁基氫氧化銨 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 四碘化鉑 容量： 保存：-20℃ 100毫克

shēng huà shì jì 四氮唑紫 容量： 2～8℃ 100克

shēng huà shì jì 四氮唑藍 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 四草酸鉀 容量： 保存：-20℃ 250毫克

shēng huà shì jì 四苯硼鈉 容量： 25克

shēng huà shì jì 四苯硼鉀 容量： 保存：-20℃ 100毫克

shēng huà shì jì 鍶 容量： 25克

shēng huà shì jì 司盤85 容量： 1克

shēng huà shì jì 司盤80 容量： 500毫克

shēng huà shì jì 司盤60 容量： 2～8℃ 25毫克

shēng huà shì jì 司盤40 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 司盤20 容量： RT 500克

shēng huà shì jì 絲素C 容量： 100克

shēng huà shì jì 絲氨醇 容量： 100克

shēng huà shì jì 順式六氫苯二甲酸酐 容量： 保存：-20℃ 100Rxn

shēng huà shì jì 順式-9-十八烯醇 容量： RT，避光 25克

shēng huà shì jì 順丁烯二酰肼 容量： 50毫升

shēng huà shì jì 順丁烯二酸鈉 容量： 2～8℃ 250毫克

JM330 感受態(tài)細胞 100ul*10shēng huà shì jì 順丁烯二酸酐 容量： 5

ACTH 人促腎上腺皮質激素 規(guī)格： 48T/96T

 CRH 人促腎上皮質激素釋放激素 規(guī)格： 48T/96T

 FSH 人促卵泡素 規(guī)格： 48T/96T

 TRH 人促甲狀腺素釋放激素 規(guī)格： 48T/96T

 TSH 人促甲狀腺素 規(guī)格： 48T/96T

 TSHR 人促甲狀腺激素受體抗體 規(guī)格： 48T/96T

 LH * 規(guī)格： 48T/96T

人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 規(guī)格： 48T/96T

 E3 人雌三醇 規(guī)格： 48T/96T

 E 人雌激素 規(guī)格： 48T/96T

 ER 人雌二醇受體 規(guī)格： 48T/96T

 E2 人雌二醇 規(guī)格： 48T/96T

 PACAP 人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽 規(guī)格： 48T/96T

 VMA 人垂草扁桃酸 規(guī)格： 48T/96T

 PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 VLA 人遲現(xiàn)抗原 規(guī)格： 48T/96T

 VLA 人遲現(xiàn)抗原 規(guī)格： 48T/96T

毫升

注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。