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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

shēng huà shì jì 克氏鐵瓊脂 容量： 25克

shēng huà shì jì 克氏雙糖鐵瓊脂（下層） 容量： RT 5米

shēng huà shì jì 克氏雙糖鐵瓊脂（上層） 容量： 150米

shēng huà shì jì 克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基 容量： 2～8℃ 5毫升

shēng huà shì jì 克雷伯氏顯色培養(yǎng)基 容量： RT 支

shēng huà shì jì 柯凡克試劑 容量： 1米

shēng huà shì jì 柯柏膠 容量： 避光，-20℃ 1克

shēng huà shì jì 考馬斯亮藍(lán)R250 容量： 5克

shēng huà shì jì 考馬斯亮藍(lán)G250 容量： 2～8°C 1克

shēng huà shì jì 抗酸染液 容量： 40片/箱

shēng huà shì jì 抗生素Ⅷ號(hào)培養(yǎng)基 容量： 100克

sAr Qual 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50ēng huà shì jì 抗生素Ⅵ號(hào)培養(yǎng)基 容量： 100克

shēng huà shì jì 抗生素Ⅴ號(hào)培養(yǎng)基 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 抗生素Ⅳ號(hào)培養(yǎng)基 容量： 100克

shēng huà shì jì 抗生素Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基 容量： 25克

shēng huà shì jì 抗生素Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基（Ph7.8～8.0） 容量： 100克

shēng huà shì jì 抗生素Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基（Ph6.5～6.6） 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 抗生素Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基（P

 LF/LTF 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 LDH 人乳酸脫氫酶 規(guī)格： 48T/96T

 Hc 人溶血補(bǔ)體 規(guī)格： 48T/96T

 HLAMP-2 人溶酶體相關(guān)膜蛋白2 規(guī)格： 48T/96T UK 大鼠* 規(guī)格： 48T/96T

 BDNF 大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T

 BNP 大鼠腦鈉素/腦鈉尿肽 規(guī)格： 48T/96T

 NGB 大鼠腦紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 BGP/Gehrelin 大鼠腦腸肽 規(guī)格： 48T/96T

 visfatin 大鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素 規(guī)格： 48

.0） 容量： 100克

shēng huà shì jì 抗生素Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基（Ph6.5～6.6） 容量： 25克

注意事項(xiàng):

1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。