我公司提供的輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣規(guī)格方法分類：紫外分光光度法、可見(jiàn)分光光度法、微量法、酶法、高效液相色譜法本方法提供代測(cè)服務(wù)!咨詢！
產(chǎn)品名稱：?輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣規(guī)格
規(guī)格：50管/24樣 測(cè)試方法：可見(jiàn)分光光度法

測(cè)定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。

測(cè)定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣規(guī)格成及試劑配制
1：預(yù)包被板: 96T/48T
2：酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRPIgG,親合純化 0.4mL x 1
3：標(biāo)準(zhǔn)品: -6 0.5mL x 2
4：EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5：標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6：顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7：終止液: 1N 12mL x 1
8：濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣規(guī)格操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 品組（6 個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。 注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul 的待測(cè)樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。
5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標(biāo)板 5 次，用吸水紙*拍干。 7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。

輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣規(guī)格注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與Z后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響 實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
3. 孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
4. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷商， 如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
Amersham、Serva、AppliChem等品牌，    BR，98%    131-48-6    保存：-20℃            500毫克        ，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，    1克        ，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，    5克        ，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，中文名稱： N-乙酰-神經(jīng)氨酸 其他中文名稱： 唾液酸；N-乙?；窠?jīng)氨酸；醋紐拉酸；N-乙酰甘露糖胺丙酮酸；N-乙酰涎酸；氧-唾液酸；N-乙酰-神經(jīng)氨(糖)酸 英文名稱： NANA 其他英文名稱： N-Acetyl-Neuraminic；Sialic acid 產(chǎn)品規(guī)格： BR,98% 包裝：100毫克/500毫克/1克/5克/25克號(hào)：131-48-6C11H19NO9=309.27級(jí)別：BR含量：≥98.0%溶解性：50mg/ml,clear colorless性狀：結(jié)晶粉末。比旋光度-32° (c=2,water)。溶于水，微溶于乙醇。熔點(diǎn)：184-186 ℃用途：生化研究。唾液酸是廣泛存在于自然界中的碳水化合物，也是許多糖蛋白、糖肽和糖脂的基本組成部分，具有廣泛的生物功能，如血蛋白半衰期的調(diào)節(jié)、多種毒素的中和、細(xì)胞粘附、免疫的抗原抗體反應(yīng)和對(duì)細(xì)胞溶解的保護(hù)。在糖蛋白或糖脂質(zhì)中，由于2位的酮基形成糖苷鍵而使它位于糖側(cè)鏈的非還原性末端，其陰電荷或*的化學(xué)結(jié)構(gòu)使其具有各種生理HPLC≥98%，20mg/vial    23513-15-7    10-姜酮醇    10- Jiang Tongchun
HPLC≥98%,20mg/vial    23513-08-8    8-姜辣醇    8- ginger?spicy alcohol
HPLC≥98%，20mg/vial    23513-14-6    6-姜酚    6-?Gingerol
HPLC≥98%，20mg/vial    20831-76-9    龍膽苦苷    Gentiopicroside
HPLC≥98%，20mg/vial    529-59-9    染料木苷    Genistein
HPLC≥98%，20mg/vial    446-72-0    金雀異黃酮    Genistein
HPLC≥98%，20mg/vial    27741-01-1    京尼平苷酸    Geniposidic acid
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣規(guī)格HPLC≥98%，20mg/vial    24512-63-8    京尼平甙    Geniposide
HPLC≥98%，20mg/vial    6902-77-8    京尼平    Genipin
HPLC≥98%，20mg/vial    3371-27-5    (-)-倍兒茶酸    (-)?-?time of?tea?acid
HPLC≥98%，20mg/vial    62499-27-8    *    Gastrodin