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更新時間:2017-05-31 14:20:00瀏覽次數(shù):143次
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豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)elisa免疫檢測試劑盒運輸
保存及運輸溫度:2-8℃低溫避光保存公司批次ELISA試劑盒供應,常見ELISA試劑盒享受折扣優(yōu)惠。ELISA試劑盒棋盤試驗的操作方法:(1)將抗原按一定的梯度倍比稀釋后,按照ELISA從上到下(或者從左到右)的順序包被。(2)將抗體按一定的梯度倍比稀釋后按照ELISA從左到右或者從上到下加入。(3)二抗的稀釋倍數(shù)是一定的,然后顯色,讀值。
產(chǎn)品名稱:豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)elisa免疫檢測試劑盒運輸
英文名稱:PorcinevonWillebrandFactor,vWFelisa Kit
性狀:盒裝液體。
保存溫度: 2~8℃。
檢測范圍:見說明書靈敏度(以隨貨英文說明書為主)。
說明書:說明書隨貨發(fā)送,您也可以直接我司在線銷售人員索取。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)elisa免疫檢測試劑盒運輸
注意事項
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好
★操作簡便,省時省力
★水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細胞
★無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低
★為1瓶溶液,毋需預制,即開即用
★適合于高通量藥物篩選
CCK-8用途:藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗
CCK-8試劑盒在國內(nèi)科研院所、重點大學、*醫(yī)院被廣泛應用,認可度高,使用CCK-8發(fā)表的中外文獻達600多篇,其中截止08年底SCI影響因子IF>10分的論文有37篇,Z高IF38.5分
2015年版中國藥典第三部363頁收載了新藥:尼妥珠單抗(Nimotuzumab)注射液,是*個以表皮生長因子受體(EGFR)為靶點的單抗藥物,也是中國*個治療惡性腫瘤的人源化單克隆抗體。商品名:泰欣生(百泰藥業(yè)生產(chǎn))。
該藥的生物學活性測定方法采用H292細胞(人肺癌淋巴結轉移細胞)增殖抑制法(通則138頁),使用了同仁化學研究所(Dojindo Laboratories)研發(fā)的CCK-8試劑。這是CCK-8檢測方法被中國藥典收載,表明該方法已經(jīng)獲得國家機構認可。
中文名稱:CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑()
英文名字:Cell counting KIT-8 (CCK-8) kit
Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗
使用說明:
一、制作標準曲線(測定細胞具體數(shù)量時)
1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,然后接種細胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3-5個細胞濃度梯度,每組3-6個復孔。
3、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD 值,制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X 軸),OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要*,便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。)
二、細胞活性檢測
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1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)(在37℃,5% CO2的條件下)。
2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
5、如果暫時不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
三、細胞增值-毒性檢測
1、在96孔板中配置100 μL 的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時(在37 ℃,5% CO2的條件下)。
2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質。在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間(例如:6、12、24或48小時)。
3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
5、用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。
6、如果暫時不測定OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
活力計算:.
細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[ A(0加藥)-A(空白)]×100
A(加藥):具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A(0 加藥):具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力
注意事項:
①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。
②白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
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