ATCC細(xì)胞采用間接ELISA法檢測(cè)所獲得的單克隆抗體細(xì)胞株的細(xì)胞上清和腹水效價(jià)。以 40 倍稀釋的免疫小鼠血清作為陽(yáng)性對(duì)照，以 DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)液、樣品稀釋液及健康小鼠血清作為陰性對(duì)照。以 A. acidoterrestris (ATCC49025)菌原液作為抗原包被酶標(biāo)板，包被濃度為 1.475×106 個(gè)/mL，每孔 0.1 mL，37 °C 2 h，4 °C 過(guò)夜；拍干后加入封閉液 37 °C 封閉 2 h，拍干后進(jìn)行檢測(cè)。加入倍比稀釋的細(xì)胞上清或腹水，37 °C 孵育 0.5 h，洗滌 3 次，再加入 1:20 000 稀釋的 HRP 標(biāo)記的羊抗鼠抗體，37 °C 孵育 0.5 h，洗滌后加底物顯色 10 min，加終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀測(cè)定 OD450值， P/N≥2.1 為陽(yáng)性，否則為陰性。
單克隆抗體亞類(lèi)鑒定如表6所示；細(xì)胞培養(yǎng)上清、腹水效價(jià)測(cè)定及亞類(lèi)鑒定結(jié)果。由表 7 可知，3F7 和 9C4 的抗體細(xì)胞上清效價(jià)和腹水效價(jià)較穩(wěn)定，而 3E12 抗體細(xì)胞上清效價(jià)檢測(cè)時(shí)跳孔嚴(yán)重，腹水無(wú)效價(jià)，這與其抗體亞類(lèi)不同密切相關(guān)。
取對(duì)數(shù)生*ATCC細(xì)胞于 10%血清培養(yǎng)基中培養(yǎng) 48−54 h，將秋水仙素加入培養(yǎng)液，使其終濃度為 0.1 µg/mL，繼續(xù)培養(yǎng) 4−6 h。小心吹打貼壁細(xì)胞， 1000 r/min 離心 10 min 后進(jìn)行低滲處理。隨后固定細(xì)胞、制片，用新鮮Giemsa染色液染色10−20 min，鏡檢觀察記錄并進(jìn)行顯微拍照。染色體計(jì)數(shù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：所得雜交瘤細(xì)胞的染色體數(shù)目處于 98−100 條之間，符合預(yù)期數(shù)量。
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ATCC細(xì)胞