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目前,血清仍是人源細(xì)胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長(zhǎng)狀況不良時(shí),常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛以后,再換成無(wú)血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個(gè)適應(yīng)過(guò)程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無(wú)血清培養(yǎng)。在降低過(guò)程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細(xì)胞死亡,存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。
為了使細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng),關(guān)鍵的是將所培養(yǎng)細(xì)胞:
1.處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期
2.>90% 活細(xì)胞率
3.適應(yīng)時(shí)以較高的起始細(xì)胞接種
以下是細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基的使用方法:
*、直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM)中。一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基。
第二、連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM)中,與直接適應(yīng)相比較,連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。
(1)以2倍正常接種密度接種生長(zhǎng)活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基:25%SFM 混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。
(2)當(dāng)細(xì)胞密度>5×105細(xì)胞/ml時(shí),以2×105到3×105細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,在有血清培養(yǎng)基:SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(3)以2×106到3×106細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。 (4)當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(5)每隔3到5天,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml,細(xì)胞活率在90%時(shí),貯備的適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
在實(shí)驗(yàn)后這些人源細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細(xì)胞能夠*培養(yǎng)于無(wú)血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)之前,要留有種子細(xì)胞,種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。
200mg Isradipine 75695-93-1 依拉地平標(biāo)準(zhǔn)品
200mg Isoxsuprine Hydrochloride 579-56-6 異舒普林鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品
200mg Isotretinoin 4759-48-2 *標(biāo)準(zhǔn)品
200mg Isopropamide Iodide 71-81-8 異丙碘胺標(biāo)準(zhǔn)品
200mg Isoniazid 54-85-3 雷米封標(biāo)準(zhǔn)品
200mg Isometheptene Mucate 7492-31-1 半乳糖二酸異美汀標(biāo)準(zhǔn)品
200mg Isomalt 64519-82-0 異麥芽酮糖醇標(biāo)準(zhǔn)品
200mg Isoflupredone Acetate 338-98-7 乙酸異氟潑尼龍標(biāo)準(zhǔn)品
200mg Isocarboxazid 59-63-2 異卡波肼標(biāo)準(zhǔn)品
人源細(xì)胞
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