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1301:人急性T淋巴細(xì)胞使用說(shuō)明書(shū)

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1301:人急性T淋巴細(xì)胞使用說(shuō)明書(shū):
     【細(xì)胞縮寫(xiě)】    1301細(xì)胞
    【細(xì)胞名稱(chēng)】    1301(人急性T淋巴細(xì)胞)
    【背景資料】    見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
    【細(xì)胞消化時(shí)注意把握消化時(shí)間,消化不夠會(huì)導(dǎo)致吹打細(xì)胞時(shí)造成損傷,一般消化時(shí)間是2-3分鐘,但以鏡檢時(shí)大部分細(xì)胞縮回球形為準(zhǔn),一般2次即可將細(xì)胞吹打下來(lái),消化不夠進(jìn)行細(xì)胞吹打易損傷細(xì)胞。細(xì)胞系的凍存液配方:90%FBS+10%DMSO,貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長(zhǎng),可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)】    細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外大學(xué)建系
    【代次】    P4
    【規(guī)格】    復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管(兩支)
    【細(xì)胞數(shù)】    1*10(6)
    【生物安全級(jí)別】    1
    【生物體】    人
    【組織來(lái)源】    器官:外周血;疾?。杭毙猿闪馨图?xì)胞性白血病;內(nèi)皮
    【細(xì)胞形態(tài)】    T淋巴細(xì)胞
    【細(xì)胞特性】    懸浮
    【特別注意:1301:人急性T淋巴細(xì)胞如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng),貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化,請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng),如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請(qǐng)及時(shí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決】    
細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng):
1、如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請(qǐng)及時(shí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決
2、貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢;適當(dāng)提高血清濃度(zui高不能超過(guò)20%),或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度,考慮*消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
3、生長(zhǎng)不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長(zhǎng),可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮1301:人急性T淋巴細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1、吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,1301:人急性T淋巴細(xì)胞加2-3ml 0.25%*進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?-2min)
2、鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ?,加6-8ml*培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散
3、取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4、注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
特別注意:(如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng))
1、收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間zui長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí))
2、貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化,請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)
3、如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并實(shí)驗(yàn)室。
Mouse Anti-influenza B virus nucleoprotein Monoclonal      規(guī)格:    規(guī)格:     0.1ml    產(chǎn)品名稱(chēng):    鼠抗人禽流感B核蛋白單克隆抗體
Anti-IFABP      規(guī)格:    規(guī)格:     0.2ml    產(chǎn)品名稱(chēng):    小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體
Anti-IFITM1       規(guī)格:    規(guī)格:     0.2ml    產(chǎn)品名稱(chēng):    干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體
Anti-IFN-β Anti-human      規(guī)格:    規(guī)格:     0.1ml    產(chǎn)品名稱(chēng):    干擾素-β抗體
Anti-IFN-γ     規(guī)格:    規(guī)格:     0.1ml    產(chǎn)品名稱(chēng):    鼠抗人干擾素-γ/IFN-gamma單克隆抗體
1301:人急性T淋巴細(xì)胞

 

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