小鼠胚胎成纖維細胞(3T3-L1)
細胞介紹
L1是通過克隆分離得到的3T3(swiss小白鼠)的連續(xù)亞株。當(dāng)細胞從快速分裂到長滿且接觸抑制時，該細胞經(jīng)過前脂肪向脂肪樣逆轉(zhuǎn)。培養(yǎng)液中，高血清含量可以促進脂肪積累。
細胞特性
1)來源：小鼠胚胎
2)形態(tài)：成纖維細胞
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入*使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
小鼠胚胎成纖維細胞(3T3-L1)細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1.準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%;北美胎牛血清 (United States，GIBCO，貨號16000-044)，10%。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
2)細胞處理：
1.復(fù)蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤雔0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2ml*培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者。
3.細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；細胞凍存時，棄去培養(yǎng)后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml*，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。lOOOrpm離心4min去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存 管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液 氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
小鼠胚胎成纖維細胞(3T3-L1)注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,瓶中。
