人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)
細(xì)胞介紹：
NCI-N87細(xì)胞表達(dá)表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72,并且沒(méi)有*胺脫羧 酶(DDC)活性。它們
的血管活性的腸肽(VIP)受體活性極低并缺乏胃泌激素受體。它們表達(dá)蕈毒堿*受體。沒(méi)有證據(jù)表
明存在N-myc, L-myc, myb和EGF受體基因的重組。這個(gè)細(xì)胞株表達(dá)的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平與
其它細(xì)胞株相當(dāng)。以下基因不表達(dá):N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2,或胃泌激素釋放肽。據(jù)報(bào)道NCI-
N87細(xì)胞的植板率為4.3%。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPIVM-1640:GIBCO,貨號(hào) 31800022,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g
八，丙酮酸鈉O.llg八)，90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
3.凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
2)細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。
在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)
瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查
細(xì)胞密度。
人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-
0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若
細(xì)胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶
補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹
勻。將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰
酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后 加入凍存管中，再添加1〇%DMSO后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢
液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
細(xì)胞特性：
1)來(lái)源：胃癌，肝轉(zhuǎn)移
2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫
條件下，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入*使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
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