怎樣選擇合適的細(xì)胞分離試劑盒
從樣品中別離提純同種細(xì)胞，是許多下游應(yīng)用的要害重要的一步，分離得到的細(xì)胞能夠用于基因判定、細(xì)胞計(jì)數(shù)、生化剖析、蛋白別離、宿主-病原體互作以及細(xì)胞間相互作用等研究。一款適宜的細(xì)胞分離試劑盒能夠說是試驗(yàn)成功的保證，因?yàn)橹灰〉谜_的細(xì)胞，下游的分析成果才能夠更。當(dāng)前，市面上有多種多樣的分離試劑盒可供挑選，它們的首要差異在于分離辦法和篩選標(biāo)志。那么，怎么挑選zui合適自己的細(xì)胞分離試劑盒呢？期望這篇文章能為你供給一些幫助。
正向選擇VS負(fù)向選擇
細(xì)胞分離試劑盒的工作原理
細(xì)胞分離試劑盒的工作原理主要有兩種，正向選擇和負(fù)向選擇。正向選擇的試劑盒，使用與目標(biāo)細(xì)胞直接結(jié)合的抗體來進(jìn)行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連，能夠利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-細(xì)胞復(fù)合物提取出來，再經(jīng)過二抗將磁珠與目標(biāo)細(xì)胞分開。負(fù)向選擇的試劑盒也選用相似的抗體包被磁珠，不過這種試劑盒是經(jīng)過去掉樣品中的非目標(biāo)細(xì)胞，來直接捕獲目標(biāo)細(xì)胞。
這兩種細(xì)胞分離試劑盒怎么取舍，首先取決于目標(biāo)細(xì)胞的外表是不是具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)志。這樣的篩選標(biāo)志能夠完成特異性的捕獲，防止所取得的細(xì)胞被非目標(biāo)細(xì)胞污染。若是你的目標(biāo)細(xì)胞剛好具有這樣的篩選標(biāo)志，那么正向選擇的細(xì)胞分離試劑盒即是挑選。但如果目標(biāo)細(xì)胞并不具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)準(zhǔn)，那咱們還是選用負(fù)向選擇的細(xì)胞分離試劑盒。
篩選標(biāo)志的斷定
經(jīng)過PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)中的文獻(xiàn)，我們通常能夠斷定在目標(biāo)細(xì)胞上表達(dá)的篩選標(biāo)志。若是文獻(xiàn)中找不到合適自己的表面標(biāo)志，我們還能夠用目標(biāo)細(xì)胞的DNA序列進(jìn)行BLAST查找。BLAST查找結(jié)果會(huì)顯示，目標(biāo)細(xì)胞上能夠表達(dá)的表面標(biāo)志，在此基礎(chǔ)上能夠選擇用于捕獲的細(xì)胞外表蛋白。舉例來說，對(duì)一個(gè)T細(xì)胞進(jìn)行BLAST查找，結(jié)果會(huì)顯示該細(xì)胞是不是表達(dá)CD4或CD8。在得知目標(biāo)細(xì)胞表達(dá)CD4之后，我們能夠先對(duì)樣品進(jìn)行一個(gè)免疫試驗(yàn)（如ELISA），以查驗(yàn)BLAST查找的成果。一旦證明目標(biāo)細(xì)胞確實(shí)表達(dá)CD4，我們就能夠用相應(yīng)試劑盒來挑選CD4陽(yáng)性的T細(xì)胞。
一般流程
關(guān)于一個(gè)旨在別離CD4陽(yáng)性T細(xì)胞的試劑盒來說，操作流程首要有以下幾步。首先，將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠一同孵育，使抗體與CD4+ T細(xì)胞結(jié)合。然后洗去不需要的非目標(biāo)細(xì)胞（即不表達(dá)CD4的細(xì)胞），留下磁珠-抗體-細(xì)胞復(fù)合物。將上述復(fù)合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一同孵育，二抗就會(huì)代替CD4+T細(xì)胞，形成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物。我們能可以磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物，而所有的CD4+細(xì)胞留在上清中。zui后，只需要將上清轉(zhuǎn)移就能可以進(jìn)行現(xiàn)有研究了。
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