一、挑選試劑
挑選質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格依照試劑闡明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。二、加樣
可能原因：
1）血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣； 2）手藝操作中，加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時(shí)刻過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。
解決辦法：
1） 標(biāo)本為血清：將血液先天然寄存1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須運(yùn)用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須當(dāng)即倒置*混合5-10次，放置一段時(shí)刻后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要儲(chǔ)存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。 4) 如果選用AT或其他全自動(dòng)加樣，挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
三、 孵育
可能原因：
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸騰，吸附于孔壁，難于清洗*； 2) 孵育時(shí)刻人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：
1) 貼封片或加蓋； 2) 按闡明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)刻。
四、洗板
可能原因：
1) 選用手藝洗板，孔與孔之間液體穿插。 2) 選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量缺乏，導(dǎo)致洗板不*；洗板針阻塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3) 反響板過多形成洗板等候時(shí)刻長(zhǎng)。
解決辦法：
1) 確保洗液注滿各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙（挑選潔凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
五、顯色
可能原因：
1) 顯色劑制造后放置時(shí)刻過長(zhǎng)或運(yùn)用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時(shí)濺起孔外形成液體回流。
解決辦法：
1) 顯色劑盡量在臨用前制造，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)堅(jiān)持顯色劑不外流； 3) A、B液應(yīng)防止觸摸金屬器械。
六、停止
可能原因如加停止液時(shí)發(fā)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性添加。所以在加停止液時(shí)應(yīng)防止發(fā)生氣泡。
ELISA實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的使用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不留意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等成果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟示，進(jìn)步實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。下面剖析ELISA實(shí)驗(yàn)操作中可能影響成果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法。
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