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閱讀:92發(fā)布時(shí)間:2017-10-23
ELISA試劑盒頂用的蒸餾 水或去離子水,ELISA試劑盒包含用于洗刷的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定(如血清 、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。
血清標(biāo)本可按慣例辦法采集,應(yīng)留心防止溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)開(kāi)釋出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為符號(hào)的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。如在冰箱中保留過(guò)久,其間的可發(fā)作聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘說(shuō)板式ELISA試劑盒各個(gè)操作進(jìn)程的留心關(guān)鍵,珠式、管式及磁性球ELSIA,國(guó)外試劑均與特別儀器合作使用,嚴(yán)厲遵循劃定操作,必能得出正確的成果。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留心不可濺起,不可產(chǎn)憤慨泡。有此測(cè)定(如間接法ELISA)需用稀的血清,可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。
在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,ELISA試劑盒加酶結(jié)合物,加底物。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,散布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清天然凝結(jié)、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液,再在其參加血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以確保混和。一般說(shuō)來(lái),在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超越一周測(cè)定的需低溫冰存??捎米鱁LISA測(cè)定的標(biāo)本非常廣泛,體液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其間某種抗體 或抗原成份,ELISA試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保留。
ELISA試劑盒的操作因固相載體的構(gòu)成不同而有所差異,國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點(diǎn)。除特別情況外,在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。加酶結(jié)合物使用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液進(jìn)程敏捷完成。如有細(xì)菌污染,ELISA試劑盒菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)發(fā)作假陽(yáng)性反應(yīng)。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以發(fā)作穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。的試劑,杰出的儀器和準(zhǔn)確的操作是確保ELISA試劑盒檢測(cè)成果正確牢靠的必要條件。
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