正式實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照操控實(shí)驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)成果的性。有時(shí)本底較高，闡明有非特異性反響，可選用羊血清、兔血清或BSA等關(guān)閉。
在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的挑選是很重要的，其間包含：
固相載體的挑選：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。當(dāng)時(shí)常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行挑選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反響，調(diào)查其顯色反響是否均一性，據(jù)此判明其吸附功能是否杰出。
包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時(shí)，要求純度要好，吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)刻及其蛋白量也有必定影響，一般多選用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它實(shí)驗(yàn)條件相一起，調(diào)查陽性標(biāo)本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于大都蛋白質(zhì)來說一般為1～10μg/ml。
酶符號抗體作業(yè)濃度的挑選：首先用直接ELISA法進(jìn)行開始效價(jià)的滴定（見酶符號抗體部份）。然后再固定其它條件或采納“方陣法”（包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里地滴定其作業(yè)濃度。
酶的底物及供氫體的挑選：對供氫體的挑選要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反響，而自身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌效果，應(yīng)留意防護(hù)。有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是當(dāng)時(shí)較為滿足的供氫體。底物效果一段時(shí)刻后，應(yīng)參加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反響。一般底物效果時(shí)刻，以10-30分鐘為宜。底物運(yùn)用液有必要新鮮制造，尤其是H2O2在臨用前參加。
目前，國內(nèi)也有許多酶聯(lián)免疫（ELISA）代測服務(wù)機(jī)構(gòu)。
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