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技術(shù)文章

ELISA試劑盒小技巧改變實(shí)驗(yàn)誤差大問題

閱讀:615發(fā)布時(shí)間:2017-9-8

江藍(lán)純是國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室供應(yīng)商,并與國內(nèi)多家科研單位緊密合作,將竭盡所能,為您提供zui便捷、*的采購服務(wù),節(jié)省您的時(shí)間和成本,服務(wù)生物科技領(lǐng)域的科學(xué)研究人員,熱誠歡迎各界前來參觀、考察、洽談業(yè)務(wù)。

ELISA試劑盒小技巧改變實(shí)驗(yàn)誤差大問題:
A、由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器,不排除不同滴頭滴量的誤差,另外滴加過程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻,是否顫動(dòng)等影響液量的因素均可導(dǎo)致以上情況,高標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí)應(yīng)使用加樣器。
B、肉眼觀察稍顯色,酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實(shí)際工作中是難以避免的,肉眼目測結(jié)果不可靠,應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。
C、不同的ELISA試劑盒廠家產(chǎn)品其生產(chǎn)工藝和操作方法會(huì)略有不同,務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作,否則容易產(chǎn)生檢測結(jié)果的不確定性。
D、加樣時(shí)樣品量誤差,對于陰或很陽的標(biāo)本影響不大,但對閾值附近的標(biāo)本影響極大,建議校對加樣器。
E、反應(yīng)時(shí)間的誤差,做大量標(biāo)本時(shí),*孔和zui后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
F、由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽性原因多為操作過程中漏加試劑等有關(guān)。
G、若不同批號試劑的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用,有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等情形。
 

ELISA試劑盒進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間,吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí),進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的OD值,選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。

 

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