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閱讀:88發(fā)布時(shí)間:2017-8-21
ELISA試劑盒: 在搜集樣本前都有必要有一個(gè)完整的方案,有必要清楚要檢測(cè)的成份是否滿足安穩(wěn)。對(duì)搜集后當(dāng)天就進(jìn)行 檢測(cè)的樣本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩jP(guān)于隔天再檢測(cè)的樣本,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的,-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)防止重復(fù)凍融。
液體類標(biāo)本: 包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培育上清等。
1. 血清:ELISA試劑盒室溫血液天然凝結(jié)10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。 2. 血漿: 應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求挑選EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
3. 尿液 用無(wú)菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)施。
4. 細(xì)胞培育上清:檢測(cè)排泄性的成份時(shí),用無(wú)菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。
5. 培育細(xì)胞:檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。經(jīng)過重復(fù)凍融或參加安排蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
6. 安排標(biāo)本:切開標(biāo)本后,稱取分量。參加一定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后依然堅(jiān)持2-8℃的溫度。參加一定量的PBS(PH7.4),或安排蛋白萃取試劑, 用手藝或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。分裝后一份待檢測(cè),其他冷凍備用。
ELISA試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技能。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每參加一種試劑孵育后,可經(jīng)過洗刷除掉剩余的游離反應(yīng)物,從而確保實(shí)驗(yàn)成果的特異性與安穩(wěn)性。在實(shí)際應(yīng)用中,經(jīng)過不同的規(guī)劃,具體的辦法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。
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