ELISA試劑盒酶符號(hào)抗體辦法主要有兩種：戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。
1、戊二醛交聯(lián)法戊二醛是一種雙功用團(tuán)試劑，它可以使酶與蛋白質(zhì)的氨基經(jīng)過它而聯(lián)接。堿性磷酸一般用此法進(jìn)行符號(hào)。交聯(lián)辦法分一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接加入酶與抗體的混合物中，反響后既得酶符號(hào)抗體。
Elisa試劑盒中常用的酶一般都用此法交聯(lián)。它具有操作簡潔、有用（結(jié)合率達(dá)60%~70%）和重復(fù)性好等長處。缺陷是交聯(lián)反響是隨機(jī)的，酶與抗體交聯(lián)時(shí)分子間的份額不嚴(yán)厲，結(jié)合物的巨細(xì)也不均一，酶與酶，抗體與抗體之間也有可能交聯(lián)，影響作用。在兩步法中，先將酶與戊二醛作用，透析除掉剩余的戊二醛后，再與抗體作用而構(gòu)成酶標(biāo)抗體。也可先將抗體與戊二醛作用，再與酶聯(lián)合。兩步法的產(chǎn)品中絕大部分的酶與蛋白質(zhì)是以1:1的份額結(jié)合的，較一步法的酶結(jié)合物更有助于本底的改善以進(jìn)步敏感度，但其偶聯(lián)的有用率較一步法低。
2、過碘酸鹽氧化法
ELISA試劑盒本法只適用于含糖量較高的酶。辣根過氧化物酶的符號(hào)常用此法。反響時(shí)，過碘酸鈉將HRP分子外表的多糖氧化為醛基很生動(dòng)，可與蛋白質(zhì)上的氨基構(gòu)成Schiff氏堿而結(jié)合。酶符號(hào)物按克分子份額聯(lián)合，其份額為：酶：抗體=1~2：1。此法簡潔有用，一般以為是HRPzui可取的符號(hào)辦法，但也有人以為所有試劑較為強(qiáng)烈，各批實(shí)驗(yàn)成果不易重演。
ELISA試劑盒按以上辦法制備的酶結(jié)合物一般都混有未結(jié)合物的酶和抗體。理論上，結(jié)合物中混有的游離酶一般不影響Elisa試劑盒中zui后的酶活性測定，因經(jīng)過*洗刷，游離酶可被除掉，并不影響終究的顯色。但游離的抗體則不同，它會(huì)與酶標(biāo)抗體競賽相應(yīng)的固相抗原，然后減少了斷合到固相上的酶標(biāo)抗體的
量。因而制備的酶結(jié)合物應(yīng)予純化，去除游離的酶和抗體后用于檢測，作用更好。、結(jié)合物制得后，在用作Elisa試劑盒前需要斷定其恰當(dāng)?shù)淖鳂I(yè)濃度。運(yùn)用過濃的結(jié)合物，既不經(jīng)濟(jì)，又可使本底增高；結(jié)合物的濃度過低，則又影響檢測的敏感性。所以有必要對(duì)結(jié)合物的濃度予以挑選。zui適的作業(yè)濃度就是指結(jié)合物稀釋至必定濃度時(shí)，能維護(hù)一個(gè)低的本底，并獲得測定的靈敏度，到達(dá)zui合適的測定條件和測定費(fèi)用的節(jié)約。就酶標(biāo)抗體自身而言，它的有用作業(yè)濃度是指與其相應(yīng)抗原包被的載體作實(shí)驗(yàn)時(shí)，能得到陽性反響的zui高稀釋度。
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