上海一研生物科研有限公司
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所 在 地上海市
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更新時(shí)間:2017-06-12 11:20:49瀏覽次數(shù):88次
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Sephadex G50 介質(zhì)10mL售后服務(wù)產(chǎn)品特點(diǎn):離心柱法;安全:無(wú)需使用二甲苯去蠟,具有安全、有效的*去蠟方法;高質(zhì)量:提取的RNA純度高,得率高;方便:操作簡(jiǎn)單、快捷,無(wú)需*類有毒試劑,無(wú)需乙醇沉淀。
公司提供的RNA/DNA 提取,完善的實(shí)驗(yàn)條件,*的設(shè)備,高素質(zhì)的實(shí)驗(yàn)人員,保證您Sephadex G50 介質(zhì)10mL售后服務(wù)的實(shí)驗(yàn)得以良好的完成。我們承諾一對(duì)一的專門服務(wù),您可以全稱參與了解實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
Sephadex G50 介質(zhì)10mL售后服務(wù)的詳細(xì)介紹:
服務(wù)流程
1)客戶提供材料
2)提取基因組RNA/DNA并確定其品質(zhì)
客戶提供
●新鮮材料或正確保存條件下材料(組織、細(xì)胞、細(xì)菌等)
●4℃保存一周,-20℃保存一個(gè)月,-80℃保存一年血液樣品(EDTA,肝素,檸檬酸鈉抗凝)
●詳細(xì)的背景資料:來(lái)源、特點(diǎn)、類型等
我們提供
基因組RNA/DNA提取、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
質(zhì)量保證
高純度RNA/DNA、完整性
貨期
3-5個(gè)工作日
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
bundling)、磷酸轉(zhuǎn)移酶(phosphotransferase)激活、核內(nèi)RNA出核、DNA復(fù)制與DNA修復(fù)。一些生理因素,諸如低氧(hypoxia)和尿糖(diabetes),可以增加GAPDH在特定細(xì)胞中的表達(dá)。GAPDH存在于幾乎所有的組織中,以高水平持續(xù)表達(dá)。
GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶,由4個(gè)30-40kDa的亞基組 GAPDH蛋白幾乎在所有組織中都高水平表達(dá),廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參,是很好的內(nèi)參抗體。
GAPDH 作為管家基因在同種細(xì)胞或者組織中的蛋白質(zhì)表達(dá)量一般是恒定的。在實(shí)驗(yàn)中,可能存在總蛋白濃度測(cè)定不準(zhǔn)確;或者蛋白質(zhì)樣品在電泳前上樣時(shí)產(chǎn)生的樣品間的操作誤差;這些誤差需要通過(guò)測(cè)定每個(gè)樣品中實(shí)際轉(zhuǎn)到膜上的GAPDH的含量來(lái)進(jìn)行校正,所以一般的western實(shí)驗(yàn)都需要進(jìn)行內(nèi)參設(shè)置。具體校正的方法就是將每個(gè)樣品測(cè)得的目的蛋白含量與本樣品的GAPDH含量相除,得到每個(gè)樣品目的蛋白的相對(duì)含量。然后才進(jìn)行樣品與樣品之間的比較。
英文名稱 Anti-GAPDH(3E12)-Loading Control
中文名稱 3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內(nèi)參抗體) Phospho-LATS1 磷酸化腫瘤抑制基因LATS1試劑盒
phospho-LKB1 磷酸化*/*蛋白激酶試劑盒
phospho-LKB1 磷酸化*/*蛋白激酶試劑盒
Phospho-LKB1 磷酸化*/*蛋白激酶試劑盒
GNRH 黃體激素釋放激素類似物試劑盒
Phospho-Lamin A + C 磷酸化核纖層蛋白A/C試劑盒
Phospho-Lck 磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白*激酶試劑盒
Lyn 膜相關(guān)蛋白*激酶Lyn試劑盒
Phospho-Lyn 磷酸化膜相關(guān)蛋白*激酶Lyn試劑盒
Phospho-Lyn 磷酸化膜相關(guān)蛋白*激酶Lyn試劑盒
LRRC4 腦瘤相關(guān)基因試劑盒
LSAMP 大腦邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白試劑盒
LRFN2 神經(jīng)突觸粘附樣分子1試劑盒
LRFN4 富含*重復(fù)序列/Ⅲ型纖維連接蛋白4試劑盒
Laminin alpha 4 層粘蛋白α4試劑盒
Laminin alpha 4 層粘蛋白α4試劑盒
lipocalin 1 脂質(zhì)運(yùn)載蛋白1試劑盒
Lymphotactin 淋巴細(xì)胞趨化因子試劑盒
LRP5L 低密度脂蛋白受體5樣蛋白試劑盒
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