一、其它elisa試劑盒的選擇
優(yōu)良的檢測試劑對于結(jié)果準確的必要性不容置疑。注意操作嚴格按照試劑說明書進行，試驗前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
（一）可能出現(xiàn)的問題
1．血清或血漿標本分離不好即進行加樣或者待檢標本污染或溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。
2．手工操作中，加樣板過多造成加樣后放人孵箱前等待時間長（特別是室內(nèi)溫度較高時），或者加樣不準確，各孔標本或試劑含量有差別。
3．加完標本再加酶試劑時酶濺出。
（二）解決方法
1．可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（如唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標本。標本為血清：將血液先于室溫放置1-2小時后，再用3000r／min離心lO分鐘；標本若為血漿，必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后立即顛倒*混合5-10次，放置一段時間后，3000r／min離心15分鐘。血清標本宜在新鮮時檢測，如在冰箱中保存過久，其中的蛋白質(zhì)可發(fā)生聚合，在間接ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4~C，超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻，宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和。
2．在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。加樣后及時放入孵箱溫育。
3．從冰箱中取出的試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4．標本較多時，請分批操作。
三、孵育
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育。此過程中可能出現(xiàn)的問題有：孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)．吸附于孔壁，難于清洗*。故應(yīng)注意溫育的溫度和時間，應(yīng)按規(guī)定力求準確，如果孵育時間人為延長，將導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍難以*清洗。為保證這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板。
四、洗板
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻也決定著實驗的成敗。ELISA就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的。采用手工洗板時，孔與孔之間液體交叉。采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足可能導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，可能導(dǎo)致抽吸不*；洗板不暢可能導(dǎo)致洗板效果差；反應(yīng)板過多可能導(dǎo)致洗板等待時間長。以上情況均可造成結(jié)果誤差，解決的方法是保證洗液注滿各孔，洗板釘暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無塵的吸水材料）上輕輕拍干；合理安排洗板時間，交替操作。
五、顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng)，反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。顯色劑盡量在臨用前配制，不用過期顯色劑肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑堅決不用；當室溫較低時應(yīng)適當延長顯色時間；加樣時保持顯色劑不外流以免造成液體回流；A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
六、終止
加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，會導(dǎo)致假陽性增加，在操作中加以注意就能避免。
七、其它elisa試劑盒讀板
讀板時板底如不清潔也可能造成讀數(shù)不準。酶標儀不應(yīng)安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15-30℃，使用前先預(yù)熱儀器l5～3O分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。
* 100克 L-甘-白二肽
* 1公斤 L-甘-甘-甘三肽
* RT，避光 5克 L-(-)樟腦磺酸
* 100毫克 雙甘氨肽
* 100毫克 6-氨基正己酸
* 100毫克 N-苯甲酰-L-酪氨酰乙酯
* 保存：-20℃ 10毫克 叔丁基苯乙腈肟碳酸酯
* 10毫克 N-羥基琥珀酰亞胺
* 1公斤 γ-L-谷氨酰對硝基苯胺一水合物
* RT 5克 L-甲狀腺素鈉
其它elisa試劑盒
