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實驗操作步驟:
a.采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。
b.立即在無菌超凈臺內用70%乙醇擦洗整個動物。
c.用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d.用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e.剔除胚胎周圍的包膜,將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
公司向您推薦Primarker™人直腸成纖維細胞鑒定試劑盒的詳細說明:
產(chǎn)品名稱 | Primarker™人直腸成纖維細胞鑒定試劑盒 |
規(guī)格 | 6次/盒 |
貨號 | YS-X6943 |
細胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng):
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10%小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5% CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細胞生長特性,在適當?shù)臅r候進行傳代,一般3~4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代:
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液,用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細胞,一般按1:2-1:5 稀釋細胞后,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。?
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個; 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
P27蛋白表達西方雜交分析試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:5次
DNA產(chǎn)物化處理試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
石蠟切片平滑肌組織染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
細胞誘導型巨噬細胞合成酶(iNOS /NOS2/mNOS)活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
通用型DNA平滑末端連接克隆試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
組織脯氨酸(proline)含量比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
體基質金屬蛋白酶(MMP-12)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
載玻片細胞PASE-2蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
10倍Tris濃縮緩沖溶 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:100毫升
組織單胺氧化酶B型(MAO-B)活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
細胞膠原蛋白(collagen)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
水源樣品微囊藻毒素(Microcystin)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
Primarker™人直腸成纖維細胞鑒定試劑盒大鼠肝星形細胞*培養(yǎng)基100mL
施氏假單胞菌 Pseudomonas stutzeri宛氏擬青霉
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeA-375 [A375], 人惡性素瘤細胞株
White MediumBR5升國產(chǎn)/進口
低轉移肺英文名稱:95-C
酸性肉湯/Acid Broth酸性罐食品無菌試驗250克國產(chǎn)/進口
檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
李氏增菌肉湯基礎(LB1,LB2) 規(guī)格: 250g 用途: 用于李斯特氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)(GB 4789.30-2010)。
嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus酸球菌 Lactococcus lactis
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae無花果曲霉 Aspergillus ficuum
小鼠食管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
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