當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> NAD激酶(NADK)可見分光光度法檢測試劑盒
貨號 | GOY-01S6324 |
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操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/24樣 |
檢測方法 | 可見分光光度法 |
貨號 | GOY-01S6324 |
商品介紹:
測定意義
NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或無機多聚磷酸[poly(P)]作為磷?;w進行磷酸化反應,生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。
測定原理:
NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;NADPH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT),通過在600 nm下測定MTT的還原速度(吸光值的變化)可反映出NADK活性的大小。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
實驗方法學:
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
茜素綠 Dye content 95%(R)-1-Boc-3-羥基吡咯烷 98% Anti-Polyprotein (Hepatitis G Virus) 庚型肝炎病多聚蛋白抗體
燦爛綠 高純級,95%2-(1-基)苯 97%Anti-ZEBRA 人類皰疹病4抗體
鉍試劑Ⅰ 97%喹唑啉 98%Anti-membrane glycoprotein E(VZV) 人水痘帶狀皰疹病gE蛋白抗體
鉍試劑II CP三氟磺酸鈧 98%Anti-HHV8/ORF K2 類皰疹病8抗體
鉍試劑II 98%四氫-2 2-二甲基-4H--4-酮 95%Anti-HHV8/ORF50 人類皰疹病8抗體
考馬斯亮藍G250 AR三(4-溴苯基) 98%Anti-HHV8/ORF50 人類皰疹病8抗體
考馬斯亮藍G250 AR,無蛋白2-甲?;邕?97%Anti-HHV8/ORF50 人類皰疹病8抗體
考馬斯亮藍G250 70%,用于電泳500ml透氣不透液墊片 40mm口徑 配套42mm口徑蓋Anti-HHV8/ORF K2 人類皰疹病8抗體
NAD激酶(NADK)可見分光光度法檢測試劑盒水質(zhì)銅、鉛、鋅、鎘、鎳與鉻混合標樣 分析標準品 兔抗小鼠IgM
水質(zhì)氟、、硫根與硝根混合標樣 分析標準品兔抗小鼠k鏈
水質(zhì)氟、與硫根混合標樣 分析標準品兔抗長爪沙鼠IgG
濃度范圍:0.125-2.22mg/L,分析標準品兔抗水貂IgG
標準溶液2.74-248mg/L,用于水質(zhì)分析驢抗人IgG
濃度范圍:19.6-247(mg/L),分析標準品驢抗兔IgG
水質(zhì)、鈉、鈣與鎂混合標樣 分析標準品驢抗豚鼠IgG
硫化物標準溶液100mg/mL,體:0.6 mg/L,1.6 mg/L,0.8 mg/L鼠抗人IgG單克隆抗體
水質(zhì)二氧化硫(法)(水劑)標樣0.5 mg/L,0.6 mg/L,0.4 mg/LPE-Cy5.5標記的兔抗犬IgM抗體
三乙烯標準溶液 1000μg/ml,溶劑:PE-Cy7標記的兔抗犬IgM抗體
中1,2,4-三標樣 分析標準品Alexa Fluor 350標記的兔抗犬IgM抗體
四乙烯標準溶液 1000μg/ml,溶劑:Alexa Fluor 488標記的兔抗犬IgM抗體
1,2,4-三標準溶液溶劑:,用于水分析Alexa Fluor 555標記的兔抗犬IgM抗體
1,2,3,4-四 分析標準品,98%Alexa Fluor 647標記的兔抗犬IgM抗體
中1,2,3,4-四標樣 分析標準品辣根過氧化物標記的兔抗犬IgM抗體
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