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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> NAD激酶(NADK)微量法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6323 |
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測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/48樣 | 微量法 | GOY-01S6323 |
商品介紹
測(cè)定意義 NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或無(wú)機(jī)多聚磷酸[poly(P)]作為磷?;w進(jìn)行磷酸化反應(yīng),生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。 測(cè)定原理: NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT),通過(guò)在600 nm下測(cè)定MTT的還原速度(吸光值的變化)可反映出NADK活性的大小。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
高酸 99.98% metals basis1,6-己二 AR,99.0%BGP(Osteocalcin/Bone Gla-protein)ELISA Kit 兔骨鈣素 ELISA試劑盒
無(wú)水碳酸 AR,99%1,6-己二 99.5%PROG ELISA Kit 魚孕/孕酮
無(wú)水碳酸 99.995% metals basis正庚 97%SCT(Salmon calcitonin) ELISA Kit 鮭魚降鈣素
鐵 AR, ≥99.5%異辛烷 for HPLC,>99% (GC)T4(Fish Thyroxine) ELISA Kit 魚類甲狀腺素
鐵 99.95% metals basis異丁基苯 99%E2 ELISA KIT 魚雌二
草酸 一水合物 AR,99.8%異丁基苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5% (GC)ACTH ELISA Kit 魚促皮質(zhì)
草酸 一水合物 CP,99.5%異丁基苯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)E ELISA Kit 魚雌
草酸 一水合物 ACS, 99.5-101.0%異丁酸酐 98%FSH ELISA Kit 魚促卵泡素
NAD激酶(NADK)微量法檢測(cè)試劑盒三七皂甙 R1 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% (HPLC)2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) 2,4-二氧乙偶聯(lián)血藍(lán)蛋白猴核糖體蛋白L10(RPL10)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
齊墩果 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%2,4-D/BSA 2,4-二氧乙偶聯(lián)牛血清白蛋白猴髓鞘堿性蛋白(MBP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
齊墩果 97%Akt/PKB 蛋白激B(抗原)猴絲氨蛋白23(PRSS23)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
麥冬皂苷D 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag) 間變型淋巴瘤激(抗原)猴骨成型蛋白10(BMP-10)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
補(bǔ)骨脂素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%5-HT(5-Hydroxy-L-tryptophan/L-5-HTP) 5-羥色猴蛋白(PP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
芍藥苷 ≥98% (HPLC)AM (Adrenomedullin; ADM) 髓質(zhì)素(多肽抗原)猴核因子相關(guān)κB結(jié)合蛋白 (NFRκB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
3,4-二羥 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥97.0% (HPLC)5-HTR1A (5-HT1A (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A) 5-羥色受體1A(多肽)猴黏膜地址素黏附分子(MAdCAM1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
紫杉 98%TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2) 金屬蛋白組織抑制因子-2(抗原)猴信號(hào)識(shí)別顆粒(SRP9)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
胡椒堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98% TIMP-3(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3) 金屬蛋白組織抑制因子(抗原)猴泛素結(jié)合E2A(UBE2A)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
植 90%,用于分子生物學(xué)ADM R, Adrenomedullin receptor 髓質(zhì)素受體(抗原)猴嗜粒趨化因子(ECF/CCL11)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
植 分析標(biāo)準(zhǔn)品VTG(vilogenin) 青鳉魚卵黃蛋白猴周期素依賴性激1(CDK1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
虎杖苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(CT) 凋亡蛋白活性因子-1(抗原)猴克拉拉蛋白(CC16)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
虎杖苷 98%Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(NT) 凋亡蛋白活性因子-1(抗原)猴血管緊張素I(ANG I)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
貝母素乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%AR (Androgen Receptor)peptide 雄激素受體(多肽抗原)猴外質(zhì)蛋白1(ECM1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
鹽巴馬汀 分析標(biāo)準(zhǔn)品5-HTR2A 5-羥色受體2A抗原猴皮膚T虜獲趨化因子(CTACK)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
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