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組成及試劑配制:
1、豬瘟病毒(CSFV)核酸檢測試劑盒方法科研用酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
豬瘟病毒(CSFV)核酸檢測試劑盒方法科研用 | 48T | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
SP-R ELISA Kit磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒
SP ELISA Kit磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體P物質(zhì)(SP)ELISA試劑盒
P-gp ELISA Kit蛋白磷酸激酶PKC/CPI-17抗體P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA試劑盒
P-cad ELISA Kit磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒
P-TAU ELISA Kit磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體P-TAU蛋白(P-TAU)ELISA試劑盒
PROM2 ELISA Kit胰輔脂酶抗體Prominin 2(PROM2)ELISA試劑盒
PL7 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框45抗體PL7抗體/抗蘇氨酰tRNA合成酶(PL7)ELISA試劑盒
PL12/AlaRS ELISA Kit過氧化氫誘導轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體PL12抗體/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)ELISA試劑盒
PSIP1 ELISA Kit核因子NFκB激活蛋白1抗體PC4,SFRS1互動蛋白1(PSIP1)ELISA試劑盒
P53 ELISA Kit第12號染色體開放閱讀框23抗體P53(P53)ELISA試劑盒
P38MAPK ELISA Kitγ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體P38蛋白激酶(P38MAPK)ELISA試劑盒
P27 ELISA Kit10號染色體開放閱讀框4抗體P27蛋白(P27)ELISA試劑盒
P21 ELISA Kit10號染色體開放閱讀框47抗體P21蛋白(P21)ELISA試劑盒
OX40L ELISA Kit10號染色體開放閱讀框81抗體OX40配體(OX40L)ELISA試劑盒
OJ/IleRS ELISA Kit19號染色體開放閱讀框47抗體OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)ELISA試劑盒
AcSDKP ELISA Kit19號染色體開放閱讀框54抗體N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA試劑盒
NAG ELISA KitN-乙酰半乳糖胺糖蛋白3、β-半乳糖轉(zhuǎn)移酶1抗體N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒
NMDAR ELISA Kit19號染色體開放閱讀框18抗體N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)ELISA試劑盒
N-Cad ELISA Kit19號染色體開放閱讀框21抗體N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)ELISA試劑盒
N-MID-OT ELISA Kit19號染色體開放閱讀框24抗體N端中段骨鈣素(N-MID-OT)ELISA試劑盒
Ext-N ELISA KitⅡ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體N端外顯肽(Ext-N)ELISA試劑盒
NT-proBNP ELISA Kit皮質(zhì)素1抗體N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒
Nogo-A Ab ELISA Kit8號染色體開放閱讀框70抗體NOGO-A抗體(Nogo-A Ab)ELISA試劑盒
NLR ELISA Kit胰羧肽酶E抗體NOD樣受體(NLR)ELISA試劑盒
NOX3/MOX2 ELISA Kit磷酸化細胞角蛋白18抗體NADPH氧化酶3(NOX3/MOX2)ELISA試劑盒
/MOX1/ ELISA Kit20號染色體開放閱讀框112抗體NADPH氧化酶1(/MOX1/)ELISA試劑盒
NHE3 ELISA Kit10號染色體開放閱讀框88抗體Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA試劑盒
CEL ELISA Kit富含半胱氨酸C端蛋白1抗體N(ε)羧乙基賴氨酸(CEL)ELISA試劑盒
MINA ELISA KitE1A激活基因刺激蛋白2抗體MYC誘導核抗原(MINA)ELISA試劑盒
mxd1 ELISA Kit細胞壁合成蛋白43抗體MAX二聚化蛋白1(mxd1)ELISA試劑盒
DUSP-1 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框29抗體MAP磷酸酶雙特異性磷酸酶1(DUSP-1)ELISA試劑盒
M2-PK ELISA Kit磷酸化p21蛋白抗體M2腎丙酮酸激酶(M2-PK)ELISA試劑盒
L-Selectin/CD62L ELISA Kit磷酸化細胞周期檢測點激酶2抗體L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒
L-LDH ELISA Kit磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體L-乳酸脫氫酶(L-LDH)ELISA試劑盒
PAL ELISA Kit磷酸化周期素依賴性激酶2抗體L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒
PAL ELISA Kit磷酸化細胞周期檢測點激酶1抗體L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒
LAO ELISA Kit磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體L-氨基酸氧化酶(LAO)ELISA試劑盒
Ki-67 ELISA Kit磷酸化α-連環(huán)蛋白抗體KI-67抗原(Ki-67)ELISA試劑盒
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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