組成及試劑配制:
1、黃頭病毒PCR檢測試劑盒品牌酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

樣本采集、存放及運輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測，也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫(yī)療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本，具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃，反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇：選用FAM通道。

Enterovirus ELISA Kit磷酸化鈣調(diào)節(jié)素抗體腸病毒(Enterovirus)ELISA試劑盒

LAMC2 ELISA Kit細胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體層粘連蛋白亞基γ-2(LAMC2)ELISA試劑盒

LN-β1 ELISA Kit磷酸化細胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體層粘連蛋白β1(LN-β1)ELISA試劑盒

LN-5 ELISA Kit磷酸化細胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體層粘連蛋白-5(LN-5)ELISA試劑盒

LN ELISA KitCD3抗體層粘連蛋白(LN)ELISA試劑盒

LN ELISA KitCD4抗體層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒

Brucella Ab IgG ELISA Kit白細胞共同抗原抗體抗體布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)ELISA試劑盒

BLM ELISA Kit白細胞共同抗原抗體抗體布盧姆綜合征蛋白(BLM)ELISA試劑盒

OPAs ELISA Kit白細胞共同抗原抗體抗體不透光相關(guān)蛋白(OPAs)ELISA試劑盒

LTB ELISA Kit間隙連接蛋白36抗體不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)ELISA試劑盒

ADMA ELISA Kit12號染色體開放閱讀框61抗體不對稱二甲基精氨酸(ADMA)ELISA試劑盒

CFI ELISA Kit12號染色體開放閱讀框63抗體補體因子I(CFI)ELISA試劑盒

CFHR1 ELISA Kit12號染色體開放閱讀框68抗體補體因子H相關(guān)蛋白1(CFHR1)ELISA試劑盒

CFH ELISA Kit細胞角蛋白15抗體補體因子H(CFH)ELISA試劑盒

CFD ELISA Kit1號染色體開放閱讀框103抗體補體因子D(CFD)ELISA試劑盒

pre-CFB ELISA Kit兒茶酚O甲基移位酶抗體補體因子B前體(pre-CFB)ELISA試劑盒

CCP ELISA Kit補體C1qTNF9鏈多肽抗體補體調(diào)節(jié)蛋白(CCP)ELISA試劑盒

C5b ELISA Kit平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體補體片斷5b(C5b)ELISA試劑盒

C5a ELISA Kit心肌病相關(guān)蛋白2補體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒

C4b ELISA Kit5號染色體開放閱讀框34抗體補體片斷4b(C4b)ELISA試劑盒

C3b ELISA KitE1A激活基因刺激蛋白1抗體補體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒

C3a ELISA Kit2號染色體開放閱讀框42抗體補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒

C4d ELISA Kit豬瘟病毒抗體補體片段4d(C4d)ELISA試劑盒

C3d ELISA Kit3號染色體開放閱讀框54抗體補體片段3d(C3d)ELISA試劑盒

C3c ELISA Kit2號染色體開放閱讀框43抗體補體片段3c(C3c)ELISA試劑盒

C3bR ELISA Kit豬瘟病毒抗體補體片段3b受體(C3bR)ELISA試劑盒

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。