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組成及試劑配制:
1、納氏蟲屬通用·PCR檢測試劑盒廠家酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
納氏蟲屬通用·PCR檢測試劑盒廠家 | Abalone Spherical VirusPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球將試管塞緊后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應管數),振蕩混勻數秒, 3000rpm離心數秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數設置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
MYOZ3 ELISA Kit生長因子受體結合蛋白14抗體肌原調節(jié)蛋白3(MYOZ3)ELISA試劑盒
MYOZ2 ELISA KitHBeAg結合蛋白4/甘油激酶抗體肌原調節(jié)蛋白2(MYOZ2)ELISA試劑盒
MYOZ1 ELISA Kit甘胺酸-N-?;D移酶樣2抗體肌原調節(jié)蛋白1(MYOZ1)ELISA試劑盒
DAG1 ELISA Kit磷脂酰基醇蛋白聚糖2抗體肌營養(yǎng)不良蛋白關聯糖蛋白1(DAG1)ELISA試劑盒
DMD ELISA Kit氧化還原酶GlyR1/核蛋白60抗體肌營養(yǎng)不良蛋白(DMD)ELISA試劑盒
MYOC ELISA Kit神經鞘脂激活蛋白3抗體肌纖蛋白(MYOC)ELISA試劑盒
MTM1 ELISA Kit甘露糖脫水酶GMDS抗體肌微管素1(MTM1)ELISA試劑盒
CDH15 ELISA Kit糖皮質激素調節(jié)元件結合蛋白1抗體肌微管鈣黏附蛋白(CDH15)ELISA試劑盒
MSE ELISA Kit糖皮質激素調節(jié)元件結合蛋白2抗體肌特異性烯醇化酶(MSE)ELISA試劑盒
SGCζ ELISA Kit膠漿成熟因子γ/GMF-γ抗體肌糖ζ(SGCζ)ELISA試劑盒
SGCε ELISA Kit谷氨酰胺轉移酶GMPS抗體肌糖ε(SGCε)ELISA試劑盒
SGCδ ELISA KitGDP甘露糖焦磷酸化酶B抗體肌糖δ(SGCδ)ELISA試劑盒
SGCγ ELISA KitG蛋白偶聯膽汁酸受體1肌糖γ(SGCγ)ELISA試劑盒
SGCβ ELISA Kit葡萄糖6-磷酸脫氨酶1抗體肌糖β(SGCβ)ELISA試劑盒
SGCα ELISA Kit葡萄糖6-磷酸脫氨酶2抗體肌糖α(SGCα)ELISA試劑盒
CNDP2 ELISA Kit葡萄糖6-N-乙?;D移酶1抗體肌肽酶2(CNDP2)ELISA試劑盒
CNDP1 ELISA Kit谷氨酰胺酶1抗體肌肽酶1(CNDP1)ELISA試劑盒
CARNS1 ELISA KitG蛋白偶聯受體GPR161蛋白抗體肌肽合酶1(CARNS1)ELISA試劑盒
CRT ELISA KitG蛋白偶聯受體GPR180蛋白抗體肌酸轉運蛋白(CRT)ELISA試劑盒
CKMB ELISA KitG蛋白通路抑制物蛋白2抗體肌酸激酶MB同工酶(CKMB)ELISA試劑盒
MYOT ELISA KitG蛋白偶聯受體GPR177蛋白抗體肌收縮蛋白(MYOT)ELISA試劑盒
MYNN ELISA KitG蛋白偶聯受體GPR89A蛋白抗體肌神經蛋白(MYNN)ELISA試劑盒
MSTN ELISA KitG蛋白偶聯受體GPRSP2蛋白抗體肌肉生長抑制素(MSTN)ELISA試劑盒
PFKM ELISA KitG蛋白偶聯受體GPRC5C蛋白抗體肌肉磷酸果糖激酶(PFKM)ELISA試劑盒
MYH9 ELISA KitG蛋白偶聯受體結合蛋白α14/Gα 14 抗體肌球蛋白重鏈9(MYH9)ELISA試劑盒
MYH8 ELISA KitG蛋白β樣蛋白抗體肌球蛋白重鏈8(MYH8)ELISA試劑盒
MYH7B ELISA KitG蛋白β5/Gβ 5 抗體肌球蛋白重鏈7B(MYH7B)ELISA試劑盒
MYH7 ELISA KitG蛋白γ13/Gγ13 抗體肌球蛋白重鏈7(MYH7)ELISA試劑盒
MYH6 ELISA KitG蛋白γ5/Gγ5 抗體肌球蛋白重鏈6(MYH6)ELISA試劑盒
MYH4 ELISA KitG蛋白γ 1/Gγ 1 抗體肌球蛋白重鏈4(MYH4)ELISA試劑盒
MYH2 ELISA Kit鳥嘌呤核苷酸結合蛋白2抗體肌球蛋白重鏈2(MYH2)ELISA試劑盒
MYH11 ELISA Kit鳥嘌呤核苷酸結合蛋白3樣蛋白抗體肌球蛋白重鏈11(MYH11)ELISA試劑盒
MYH10 ELISA Kit溶酶體累積病相關蛋白/口吃相關蛋白抗體肌球蛋白重鏈10(MYH10)ELISA試劑盒
MYH1 ELISA Kit溶酶體累積病相關蛋白/口吃相關蛋白抗體肌球蛋白重鏈1(MYH1)ELISA試劑盒
MYLK ELISA Kit促性腺激素釋放激素2抗體肌球蛋白輕鏈激酶(MYLK)ELISA試劑盒
MYL9 ELISA Kit氨基葡萄糖6-硫酸酯酶抗體肌球蛋白輕鏈9(MYL9)ELISA試劑盒
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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