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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 乙醇脫氫酶(ADH)紫外分光光度法
NADH氧化酶(NOX)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑
乳酸脫氫酶(LDH)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑
貨號(hào) | GOY-01S6342 |
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操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測(cè)方法 | 紫外分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6342 |
商品介紹:
測(cè)定意義
ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過(guò)程中起著重要作用。哺乳動(dòng)物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。
測(cè)定原理:
ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒(méi)有;測(cè)定340nm 吸光度下降速率,來(lái)計(jì)算ADH活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1ml石英比色皿、可調(diào)式移液器和雙蒸水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
二甲基雙十八烷基氯化銨 97%2-苯基 98%Anti-MIP-3 Beta/ELC/CCL19/FITC 熒光素標(biāo)記巨噬炎性蛋白3β 抗體IgG
N-乙基-N-(3-磺基)-3-甲氧基苯鈉鹽 99%1,3-二(4-氨苯氧基)苯 98%Anti-MIP4/CCL18/FITC 熒光素標(biāo)記巨噬炎癥蛋白4抗體IgG
十六烷基二甲基乙基 98%2-基吡 98%Anti-Midnolin isoform Protein 1/FITC 熒光素標(biāo)記中腦核仁蛋白1抗體IgG
N-乙基-N-(3-磺基)-3-鈉鹽 98%對(duì)苯甲酸叔丁酯 98%Anti-Midnolin isoform Protein 2/FITC 熒光素標(biāo)記中腦核仁蛋白2抗體IgG
N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基)-3-甲氧基苯鈉鹽 99%3,5-二三氟甲苯 98%Anti-MIF /FITC 熒光素標(biāo)記巨噬移動(dòng)抑制因子抗體IgG
N-乙基-N-(3-磺基)苯鈉鹽 99%4-叔丁基環(huán)己 98%Anti-MITF/FITC 熒光素標(biāo)記小眼相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG
2-乙基己氧基 99%間三氟甲苯 99%Anti-Mitofilin/IMMT /FITC 熒光素標(biāo)記線粒體內(nèi)膜蛋白抗體IgG
固藍(lán)B 90%2-乙酰吡 98%Anti-MK(Midkine) 熒光素標(biāo)記中期因子/肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子抗體IgG
乙醇脫氫酶(ADH)紫外分光光度法聚乙二單 平均分子量1000雞可溶性間粘附分子1(sICAM-1)免疫試劑盒酰肽受體3抗體(脂氧素A4受體)MAPKAP Kinase 2 絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體
酐 98%雞可溶性E選擇素(sE-selectin)免疫試劑盒兜蛋白抗體MAPK4 絲裂原活化蛋白激4抗體
1,3- 98%雞抗人IgM antibody 免疫試劑盒脂肪堆積和肥胖相關(guān)蛋白抗體MAPK13/SAPK4/p38delta 絲裂原活化蛋白激13抗體
氫氧化 AR,90%雞抗人IgG antibody 免疫試劑盒核苷交換因子FARP2抗體MAPK11/p38Beta 絲裂原活化的蛋白激p38β抗體
結(jié)晶碳 CP,98%雞抗人IgA antibody 免疫試劑盒FK506結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白抗體(他克莫司相關(guān)蛋白)MAPK organizer 1/Morg1 絲裂原活化蛋白激組織蛋白1抗體
三鈉 97%雞抗Ⅲ(AT-Ⅲ)抗體免疫試劑盒成纖維生長(zhǎng)因子受體1原癌因伴侶蛋白抗體MAP-9 微管相關(guān)蛋白9抗體
丁二酐 AR,98%雞抗鏈球菌溶血素O(ASO)抗體(IgM)免疫試劑盒鈣粘蛋白家族成員7抗體MAP7D1/RPRC1 精氨/脯氨富含卷曲蛋白1抗體
丁二 AR,99.5%雞抗鏈球菌溶血素O(ASO)抗體(IgG)免疫試劑盒Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體MAP65/ASE 1 擬南芥MAP65蛋白抗體
氫氧化鈉 AR,96%雞抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒細(xì)絲蛋白A抗體MAP4K6/MINK1 絲裂原活化蛋白激MAP4K6抗體
氫氧化鈉 GR,97%,片狀雞巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)免疫試劑盒化細(xì)絲蛋白A抗體MAP4K4 絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體
三 AR,99.0%雞窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒化細(xì)絲蛋白A抗體MAP4K1 造血祖激1抗體
三 測(cè)序雞降鈣素(CT)免疫試劑盒DNA損傷修復(fù)因XRCC9抗體MAP4 微管相關(guān)蛋白4抗體
三 for HPLC, ≥99.5% (GC)雞堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)免疫試劑盒化細(xì)絲蛋白A抗體MAP3K9 絲裂原活化蛋白激3K9抗體
三 for LC-MS, ≥99.5%雞狀腺素(T4)免疫試劑盒化神經(jīng)膜抗體MAP3K8/TPL2 絲裂原活化蛋白激激8抗體
三酐(TFAH) 衍生級(jí) (for GC), ≥99.0% (GC)雞狀旁(PTH)免疫試劑盒化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體MAP3K7IP3 NFKB激活蛋白1抗體
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